武漢莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄酶試劑研發(fā)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-04-13

RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄引物設(shè)計(jì)原則:1.上下游引物要保守:擴(kuò)增子長(zhǎng)度需選擇一段保守片段(100-200bp)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,選擇片段需跨越內(nèi)含子,因內(nèi)含子的基因組DNA序列不會(huì)被擴(kuò)增,也可減少?gòu)奈廴镜幕蚪MDNA中擴(kuò)增得到的假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)。引物選取同樣需要保守。2.引物長(zhǎng)度和Tm值:引物設(shè)計(jì)長(zhǎng)度為18-25bp,Tm值在50-65℃之間,引物中GC含量在40-60%。設(shè)計(jì)引物時(shí)盡量避免出現(xiàn)4個(gè)或超過(guò)4個(gè)G堿基。RT-PCR實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照:反轉(zhuǎn)錄陰性對(duì)照應(yīng)包括在所有的RT-PCR的實(shí)驗(yàn)中,用來(lái)檢測(cè)DNA是否污染(如基因組DNA或PCR產(chǎn)物)。該對(duì)照所指不加反轉(zhuǎn)錄酶,通過(guò)反轉(zhuǎn)錄過(guò)程得到cDNA在進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。如檢測(cè)到擴(kuò)增,則樣本中可能含有基因組DNA污染。質(zhì)粒RNA檢測(cè)中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)需要特定反應(yīng)體系。武漢莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄酶試劑研發(fā)

逆轉(zhuǎn)錄是指以RNA為模板合成DNA的過(guò)程,即將遺傳信息由RNA逆向傳給DNA的過(guò)程,其遺傳的傳遞方向與轉(zhuǎn)錄相反。反轉(zhuǎn)錄酶也可寫成逆轉(zhuǎn)錄酶又稱為依賴RNA的DNA聚合酶。是以RNA為模板指導(dǎo)三磷酸脫氧核苷酸合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的酶。哺乳類C型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶和鼠類B型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉(zhuǎn)錄酶則由兩上亞基結(jié)構(gòu)。真核生物中也都分離出具有不同結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄酶。RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性;以RNA為模板,催化dNTP聚合成DNA的過(guò)程。此酶需要RNA為引物,多為色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反轉(zhuǎn)錄酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此沒(méi)有校正功能,所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯(cuò)率比較高。帶gDNA Remover反轉(zhuǎn)錄測(cè)序逆轉(zhuǎn)錄可用于新型病毒的檢測(cè)。

反轉(zhuǎn)錄酶的用處:由它催化轉(zhuǎn)錄合成的DNA稱為互補(bǔ)DNA(cDNA)。通常情況下,細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄應(yīng)由DNA到RNA的,所得RNA為信使RNA(mRNA)供蛋白質(zhì)合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要實(shí)現(xiàn)自身擴(kuò)增,必須具有DNA,因此先由RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA再由cDNA轉(zhuǎn)錄出RNA。逆轉(zhuǎn)錄酶可用RT—PCR,將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA后擴(kuò)增,以獲得RNA的序列。1970年從致死RNA病毒中發(fā)現(xiàn)了反轉(zhuǎn)錄酶,并認(rèn)為此酶與病毒的致死性質(zhì)有關(guān)。反轉(zhuǎn)錄酶也分布于某些正常細(xì)胞和胚胎細(xì)胞。反轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)表明不能把生物的遺傳信息由DNA→mRNA→蛋白質(zhì)非?;?,遺傳信息也可以從RNA傳遞到DNA。它促進(jìn)了分子生物學(xué)、生物化學(xué)和病毒學(xué)的研究,已成為研究這些學(xué)科的有力工具。

逆轉(zhuǎn)錄酶實(shí)驗(yàn)流程:從細(xì)胞材料中提取RNA→RNA加入到含有逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTPs的反應(yīng)體系中→退火,引物與RNA鏈配對(duì)→延伸,逆轉(zhuǎn)錄酶合成互補(bǔ)cDNA鏈變性→常規(guī)PCR反應(yīng)流程(變性、退火、延伸,如此多次循環(huán))。RT-PCR“兩步法”與“一步法”RT-PCR的實(shí)驗(yàn)操作分為“一步法”與“兩步法”兩種。一步法RT-PCR能克隆微量mRNA而不需構(gòu)建cDNA文庫(kù)(即cDNA合成與PCR反應(yīng)在同一Buffer及酶中進(jìn)行,一步法完成),省略了cDNA與PCR之間的過(guò)程。兩步法RT-PCR首先用反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA,然后以cDNA為模板進(jìn)行PCR,即RNA反轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增分兩步進(jìn)行。逆轉(zhuǎn)錄PCR在檢測(cè)病毒、診斷疾病等方面有普遍應(yīng)用。

逆轉(zhuǎn)錄是一種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,它在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要的作用。逆轉(zhuǎn)錄是指將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA的過(guò)程,與正常的DNA轉(zhuǎn)錄成RNA的過(guò)程相反。這個(gè)過(guò)程由逆轉(zhuǎn)錄酶來(lái)完成,而逆轉(zhuǎn)錄酶是一種酶類蛋白質(zhì),普遍存在于病毒和一些細(xì)胞中。逆轉(zhuǎn)錄的重要性在于它是某些病毒的復(fù)制過(guò)程中必不可少的一步。許多病毒的遺傳物質(zhì)是RNA分子,而它們必須先將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA,才能利用細(xì)胞的合成機(jī)制來(lái)進(jìn)行復(fù)制。這種轉(zhuǎn)錄過(guò)程一旦完成,病毒的DNA就可以與宿主細(xì)胞的DNA結(jié)合在一起,從而使病毒的遺傳物質(zhì)被復(fù)制并傳遞下去。逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程需適當(dāng)?shù)腞NA質(zhì)量,過(guò)少或質(zhì)量不佳將影響擴(kuò)增效果。上海帶gDNA Remover逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)時(shí)要記錄反應(yīng)體系的溫度、時(shí)間、反應(yīng)試劑的添加量等參數(shù)。武漢莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄酶試劑研發(fā)

逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)是以RNA為模板合成DNA的過(guò)程,即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。此過(guò)程中,核酸合成與轉(zhuǎn)錄(DNA到RNA)過(guò)程與遺傳信息的流動(dòng)方向(RNA到DNA)相反,故稱為逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄與反轉(zhuǎn)錄嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)沒(méi)有什么區(qū)別,但是逆轉(zhuǎn)錄是某些病毒的自主行為,如逆轉(zhuǎn)錄病毒,它們?cè)谡系剿拗骷?xì)胞內(nèi)前以RNA為模板形成DNA的過(guò)程;反轉(zhuǎn)錄是進(jìn)行基因工程過(guò)程中,人為地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之為模板人工合成DNA的過(guò)程。二者雖同為RNA→DNA的過(guò)程,但地點(diǎn)不同,相對(duì)性的來(lái)說(shuō),逆轉(zhuǎn)錄在體內(nèi),反轉(zhuǎn)錄在體外。武漢莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄酶試劑研發(fā)

蘇州英澤生物醫(yī)藥科技有限公司坐落于張家港經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)(市高新技術(shù)創(chuàng)業(yè)服務(wù)中心)F幢3樓,是集設(shè)計(jì)、開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)、銷售、售后服務(wù)于一體,醫(yī)藥健康的生產(chǎn)型企業(yè)。公司在行業(yè)內(nèi)發(fā)展多年,持續(xù)為用戶提供整套R(shí)NA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR的解決方案。本公司主要從事RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR領(lǐng)域內(nèi)的RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR等產(chǎn)品的研究開(kāi)發(fā)。擁有一支研發(fā)能力強(qiáng)、成果豐碩的技術(shù)隊(duì)伍。公司先后與行業(yè)上游與下游企業(yè)建立了長(zhǎng)期合作的關(guān)系。依托成熟的產(chǎn)品資源和渠道資源,向全國(guó)生產(chǎn)、銷售RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR產(chǎn)品,經(jīng)過(guò)多年的沉淀和發(fā)展已經(jīng)形成了科學(xué)的管理制度、豐富的產(chǎn)品類型。蘇州英澤生物醫(yī)藥科技有限公司以先進(jìn)工藝為基礎(chǔ)、以產(chǎn)品質(zhì)量為根本、以技術(shù)創(chuàng)新為動(dòng)力,開(kāi)發(fā)并推出多項(xiàng)具有競(jìng)爭(zhēng)力的RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR產(chǎn)品,確保了在RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR市場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)。