外泌體分離方法之篩分分離法:該技術(shù)是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進(jìn)行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時(shí)間較短，但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點(diǎn)在于分離的外泌體回收率較低?？傊?，細(xì)胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞外泌體分離方法目前多數(shù)還是采用高速離心機(jī)進(jìn)行離心分離的技術(shù)方法，然而，其他幾種分離技術(shù)，如過濾法、免疫分離法和篩分法，雖然也能進(jìn)行外泌體分離，但每種方法都有其局限性，多數(shù)還是只應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室、科學(xué)研究等領(lǐng)域。分離過程中避免對(duì)外泌體結(jié)構(gòu)和功能造成影響至關(guān)重要。合肥上清外泌體報(bào)價(jià)表
外泌體分離方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比：差速離心法：差速離心法仍是實(shí)驗(yàn)中常用的外泌體分離技術(shù)。主要步驟如下：1.使用離心機(jī)低速離心來去除細(xì)胞與細(xì)胞碎片。2.而后增加轉(zhuǎn)速通過離心來消除樣本中較大的細(xì)胞囊泡。3.再使用高速離心機(jī)進(jìn)行高速離心，通過離心沉淀的方式提取外泌體。在這里，需要注意的是生物流體的粘度與分離的外泌體的純度有較強(qiáng)的相關(guān)性。所以，對(duì)于高粘度的生物樣品需要超速離心機(jī)進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的離心操作。外泌體分離方法之免疫分離法：免疫芯片方法基于表面外泌體受體，用于根據(jù)來源分離外泌體。獲得的外泌體可直接分析或用于DNA或總RNA分離。外泌體胞內(nèi)蛋白可用作分離外泌體的特異性標(biāo)志物。此外，基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分離外泌體。其原理是：使用涂有外泌體抗體的ExoTEST板，可以從各種生物體液中分離出外泌體。該方法適用于常見和細(xì)胞類型特異性外泌體蛋白的檢測(cè)、分析和定量。青島腦脊液外泌體生產(chǎn)商超高速離心是常用的外泌體分離方法之一。
外泌體分離方法之密度梯度離心法：這種方法將超速離心機(jī)的超速離心與蔗糖密度梯度相結(jié)合。具體地說，密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒（例如蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/RNA聚集體）分離。因此，該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時(shí)間比較重要，否則如果外泌體部分具有相似的密度，則仍可能在外泌體部分中發(fā)現(xiàn)污染顆粒。該結(jié)構(gòu)不會(huì)讓大于1μm的細(xì)胞和其他顆粒進(jìn)入布線區(qū)域。一些較小的顆粒和細(xì)胞碎片可以進(jìn)入微柱區(qū)域，但被納米纖毛排除，形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結(jié)構(gòu)選擇性地捕獲外泌體和小細(xì)胞外囊泡。
外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測(cè)方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測(cè)定，而ELISA檢測(cè)提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測(cè)和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測(cè)特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。外泌體的分析需要根據(jù)不同來源的細(xì)胞選擇適宜的分離方法。
通過對(duì)外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn)：外泌體除了蛋白質(zhì)，外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標(biāo)志物。此外，據(jù)報(bào)道，肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會(huì)增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會(huì)升高。研究表明，外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現(xiàn)。有趣的是，外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標(biāo)志物。對(duì)于進(jìn)行型退行型疾病，在阿爾茨海默者的生物體液中發(fā)現(xiàn)了幾種miRNA，如：miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達(dá)水平。外泌體與細(xì)胞死亡形式相關(guān)，可以參與凋亡和壞死細(xì)胞的清理和處理過程。青島腦脊液外泌體生產(chǎn)商
外泌體受到多種因素的調(diào)控，例如細(xì)胞膜電位、氧化應(yīng)激和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。合肥上清外泌體報(bào)價(jià)表
外泌體還參與神經(jīng)退行型癥。在神經(jīng)退行型癥個(gè)體的腦脊液和外周血中已檢測(cè)到幾種特定于阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥和Creutzfeldt-Jakob的聚集蛋白。特別是，在從阿爾茨海默者的腦脊液樣本中獲得的外泌體中檢測(cè)到Thr-181磷酸化的tau。在Thr-181磷酸化的Tau是阿爾茨海默的既定生物標(biāo)志物。此外，α-突觸核的蛋白也常在阿爾茨海默者的群體中檢出。此外，在尿液中發(fā)現(xiàn)的外泌體標(biāo)志物也可以是膀胱和前列腺疙瘩的標(biāo)志物。比如：視黃酸誘導(dǎo)蛋白3(GPRC5A)、抵抗素、外泌體蛋白PCA-3、TMPRSS2:ERG、α1-抗胰蛋白酶、組蛋白H2B1等。除了腦和泌尿道疙瘩外，外泌體蛋白也可以是胰腺病的標(biāo)志物。比如：結(jié)直腸病的外泌體蛋白標(biāo)志物包括EpCAM、cadherin-17、粘蛋白13(MUC-13)、角蛋白18、claudins和ephrinB1。合肥上清外泌體報(bào)價(jià)表
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