Micro Drop基座檢測(cè)需要的樣本量:
雖然基座檢測(cè)時(shí)樣本的量不是特別關(guān)鍵,但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱,這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液橋。
決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水分子的氫鍵結(jié)合力。通常情況下,溶液中所有的溶質(zhì)(包括:蛋白,DNA,RNA,鹽離子,去垢劑分子)都會(huì)降低表面張力,因?yàn)檫@些分子能夠和水分子的氫鍵產(chǎn)生作用。雖然一般情況下1μl的樣本就足可以檢測(cè)了,但對(duì)于那些表面張力比較小的樣本比較好使用2μl樣本來檢測(cè)。
現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)表明下列樣本的用量足夠得到準(zhǔn)確重復(fù)性高的檢測(cè)結(jié)果:
核酸水溶液:1μl;
純蛋白:2μl;
Bradford,BCA,Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗(yàn):2μl;
微生物細(xì)胞懸浮液:2μl。
分光光度法是在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。山東操作簡(jiǎn)便超微量分光光度計(jì)樣品檢測(cè)
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,光線透過測(cè)試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比,其關(guān)系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強(qiáng)度;
I 為透射的單色光強(qiáng)度;
T 為物質(zhì)的透射率;
k 為摩爾吸收系數(shù);
L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長(zhǎng);
c 為物質(zhì)的濃度;
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
河北性價(jià)比高超微量分光光度計(jì)紫外檢測(cè)Micro Drop的基座模式可檢測(cè)0.5-2μl的樣本。
測(cè)試在紫外區(qū)有吸收的樣品時(shí)用石英比色皿,測(cè)試只在可見光區(qū)有吸收的樣品時(shí)使用玻璃比色皿。石英比色皿在可見和紫外光區(qū)沒有吸收,而玻璃比色皿在紫外區(qū)有吸收,所以不能用于紫外光區(qū)。對(duì)于一般的非光學(xué)專業(yè)人員,用眼睛是不能分開的兩種比色皿的。但是兩者硬度差別很大很大。石英比色皿比玻璃比色皿硬度大(***值)幾十倍,如果把兩個(gè)對(duì)磨,石英比色皿將很少被磨損,而玻璃比色皿磨損非常大。由于石英比色皿的透光范圍從0.12-4.5微米,***的譜段范圍內(nèi)沒有任何吸收峰。而玻璃比色皿只有0.4-4微米,且有許多離子吸收峰。所以,石英比色皿要比玻璃比色皿優(yōu)越的多,化驗(yàn)數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確、更可靠。
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測(cè)功能:
Protein BCA檢測(cè)類型:
BCA是一種通過比色來檢測(cè)非純蛋白的濃度的方法,它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測(cè),以及那些在紫外區(qū)域含有吸收光雜質(zhì)的蛋白的濃度檢測(cè)。BCA法需要在蛋白定量前構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
BCA法是檢測(cè)Cu+1離子的方法,在堿性環(huán)境下,Cu+2離子會(huì)被蛋白還原為Cu+1離子。兩個(gè)聯(lián)喹啉二羧酸BCA分子和一個(gè)Cu+1離子會(huì)形成紫色的螯合物。在有蛋白存在的情況下,以750nm波長(zhǎng)的吸光值為基線,Cu-BCA形成的螯合物在562nm處有比較大吸光值。
常規(guī)檢測(cè)使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1,檢測(cè)濃度范圍為0.20mg/ml到8.0mg/ml(BSA)。當(dāng)使用基座檢測(cè)時(shí),推薦使用4μl樣品和80μlBCA試劑。
微量檢測(cè)使用試劑/樣品的體積比為1:1,可以檢測(cè)蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/ml。要準(zhǔn)備足夠的樣品來做基座檢測(cè),建議使用10μl樣品和10μlBCA試劑(使用PCR管)。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保在所有檢測(cè)過程中,每個(gè)樣品的處理時(shí)間及環(huán)境溫度一致。
分光光度計(jì)是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
超微量分光光度計(jì)在核酸定量和分析中的應(yīng)用:
分光光度測(cè)定法是一項(xiàng)定量和分析生物成分的成熟技術(shù)。其中,核酸是生物實(shí)驗(yàn)室**常檢測(cè)的生物成分之一。確定這些樣品的濃度和純度對(duì)許多下游實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。
核酸主要吸收260nm下的紫外光,其濃度可以應(yīng)用朗伯比爾定律通過它們的相關(guān)消光系數(shù)和樣品光程計(jì)算出來。
首先,260nm的紫外光直接照射樣品,并且穿過樣品,而另一邊的光電檢測(cè)器則測(cè)定有多少光被吸收。通過對(duì)照參比(一般是樣品稀釋液),可以定量樣品中的核酸濃度。
消光系數(shù)是被測(cè)溶液對(duì)光的吸收大小值。上海高靈敏度超微量分光光度計(jì)紫外檢測(cè)
用來測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見光(400~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計(jì)。山東操作簡(jiǎn)便超微量分光光度計(jì)樣品檢測(cè)
Micro Drop蛋白質(zhì)檢測(cè)功能:
Protein Lowry檢測(cè)方式:
Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環(huán)境下反應(yīng)形成銅-蛋白復(fù)合物。Folin-Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復(fù)合物,產(chǎn)生與蛋白量成比例的藍(lán)色產(chǎn)物。檢測(cè)該藍(lán)色產(chǎn)物在650nm處的吸光值,并在405nm處做基線校正,計(jì)算得出蛋白的濃度。試驗(yàn)中使用的試劑可以從多個(gè)廠家購(gòu)買。與其他比色法一樣,Lowry法進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)前也需要構(gòu)建一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
推薦使用20μl的蛋白樣品和100μl Lowry試劑來做反應(yīng)。在Micro Drop上可以檢測(cè)的樣品濃度范圍為0.20mg/ml到4mg/ml。
按照試劑盒生產(chǎn)廠家的說明來準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和和構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。確保在所有檢測(cè)過程中,每個(gè)樣品的處理時(shí)間及環(huán)境溫度一致??梢詮脑噭┖猩a(chǎn)廠家購(gòu)買用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(BSA)。
山東操作簡(jiǎn)便超微量分光光度計(jì)樣品檢測(cè)
上海寶予德科學(xué)儀器有限公司致力于醫(yī)藥健康,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量管理的追求。寶予德?lián)碛幸恢Ы?jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供移液器,吸頭,酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)。寶予德繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng),又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。寶予德始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè)。滿足市場(chǎng)需求,提高產(chǎn)品價(jià)值,是我們前行的力量。