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WB（Westernblot），即蛋白印跡或免疫印跡（immunoblotting），是一項在分子生物學、生物化學、免疫學等領域中應用非常廣的技術。這一技術利用抗體與組織或細胞樣品中特定蛋白的特異性結合作用，根據(jù)顯色條帶的位置和強弱實現(xiàn)蛋白鑒定和表達分析。WB技術具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性。選用合適的內參抗體能夠校正蛋白定量和上樣過程中的誤差，通過灰度計量可以定性或定量分析不同樣品中蛋白表達情況。做第三方檢測時為什么有時候條帶會出現(xiàn)拖帶或者彎曲？在使用特定裂解緩沖液時，或者一些植物或脂肪含量高的樣品中成分較復雜，會對電泳條帶產生干擾；樣品變性不徹底、有降解發(fā)生、修飾、上樣過大等情況會導致拖帶，凝膠不均勻、電泳裝置滲漏、電壓/電流過大、膠孔不平等原因會導致條帶彎曲，當很小分子量的蛋白電泳到接近凝膠下沿時也會出現(xiàn)條帶扭曲。瑞普信生物技術有限公司專業(yè)的第三方檢測Western Blot。
“做miRNA下調，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現(xiàn)，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA ，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現(xiàn)出陽性，此外，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經膠質瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。瑞普信生物技術有限公司第三方檢測國產試劑盒。甘肅病理切片第三方檢測報告
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