抗體第三方檢測報告

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    3充分裂解后。12000rpm離心5min，取上清。4取部分上清蛋白用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，按如下步驟①按試劑盒說明書將A液和B液以501的比例配制成工作液；②取2000μg/mL的BSA標(biāo)準(zhǔn)品，用PBSpH2000μg/mL、1500μg/mL、1000μg/mL、750μg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、25μg/mL、0μg/mL共9時間就是金錢，效率就是生命唯有惜時才能成功，唯有努力方可成就個濃度梯度；③取上清液10μL，用PBS稀釋20倍；④每管中加20μL蛋白標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后的上清液，再加上述工作液，37℃孵育30min，562nm處測吸光度，記錄OD值；⑤根據(jù)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及相應(yīng)OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲曲線線yy00..00000077xx00..11553322RR2200..0..4400..8811..2211..000000濃濃度度uugg//mmLLOODD值值各各濃濃度度標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品線線性性各各濃濃度度標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程計算樣品總蛋白濃度（mg/mL）樣品.OD值mg/、Western-Blot檢測總蛋白中目的蛋白表達(dá)。1灌膠①蒸餾水清洗灌膠玻璃板，豎直晾干。②配制13％分離膠10mL，加TEMED10μL、10％過硫酸銨100μL，混勻后立即灌膠，灌至齒梳下緣2～3mm（事先做好標(biāo)記），用異丙醇封閉液面以去除氣泡并隔絕空氣，室溫靜置45min待膠完全聚合。瑞普信生物技術(shù)有限公司靠譜的第三方檢測公司。

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磷酸化蛋白的WB第三方檢測有哪些方法呢？50 度水浴 30min 后，用 TBST 洗 5 分鐘 ,3 次即可去除已孵育結(jié)合的抗體。許多人會建議 55 度水浴 30min。Strip solution 是用來去除已結(jié)合的抗體，但也會去除部分的蛋白，導(dǎo)致蛋白信號變?nèi)酢Ｎ冶救私?jīng)實驗發(fā)現(xiàn)水浴時有時溫度不穩(wěn)定，溫度定為 55 度時往往其溫度容易超過，導(dǎo)致較多的蛋白也被去除，故建議溫度設(shè)為 50 度 30min ，既能有效去除已結(jié)合的抗體，又比 55 度更能保護(hù)蛋白。Strip 時一定要注意： membrane 一定要完全泡在 strip solution 中（可用較硬的塑料膜封好），然后要完全浸入水中，使受熱均勻 。這一點很重要，要不然，隨后壓出來的總蛋白也好，內(nèi)標(biāo)也好就會不均一，無法進(jìn)行比較。我曾將同一張membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次，分別壓不同的抗體（因為有時候蛋白分子量很接近），效果都不錯。抗體第三方檢測報告

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