云南病理包埋第三方檢測公司

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“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”如何解決呢？反義核酸是在轉錄后水平發(fā)揮功能，要阻斷miRNA的產(chǎn)生，理想情況是在生成成熟的miRNA之前阻斷。此要求目前唯有CRISPR / Cas9能實現(xiàn)，Cas9通過在pre-miRNA序列中引入突變，從而破壞miRNA表達，是miRNA基因功能缺失研究的一種新方法。福建肖老師運用Cas9技術，針對miR-21基因設計sgRNA ，通過慢病毒遞送細胞，并在RNA水平檢測到mir-21的下調(diào)表達，從而研究出miR-21耗竭對CNE2鼻咽（NPC）細胞生物學特性及其潛在機制的影響。使用Cas9敲除miR-21之后，功能上也呈現(xiàn)出陽性，此外，溫醫(yī)大醫(yī)院的張老師使用Cas9敲除mir-545，研究了人環(huán)狀RNA PRKCI（circPRKCI）通過抑制miR-545顯示致性，促進人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的病理進展3。所以，CRISPR / Cas9對于miRNA的KO是有效的、被認可的、且以QPCR檢測表達量完全沒有問題。貴州AAV第三方檢測瑞普信生物技術有限公司專業(yè)第三方檢測細胞轉染實驗！

第三方檢測細胞實驗，QPCR實驗，RT-PCR代測，QPCR代測，購買ELISA試劑盒、抗體，儀器設備，找成都瑞普信。QPCR實驗常見問題合集：3.標準曲線線性關系不佳。問題判斷及解決：加樣存在誤差:使得標準品不呈梯度。標準品出現(xiàn)降解:應避免標準品反復凍融，或重新制備并稀釋標準品。引物或探針不佳:重新設計更好的引物和探針。模板中存在抑制物，或模板濃度過高?；A實驗靠譜第三方檢測公司，第三方WB實驗、QPCR實驗、ELISA試劑盒檢測服務，就找瑞普信。

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“做miRNA下調(diào)，QPCR檢測miRNA，表達水平無變化”，這到底是怎么回事？現(xiàn)有miRNA抑制手段，無論是基于載體構建的、還是化學合成的，本質(zhì)上都是用跟成熟體互補的反義miRNA（miRNA海綿體屬于不完全互補的反義RNA重復），其可以通過結合miRNA，阻斷其與靶基因結合，但并不能有效引發(fā)miRNA的降解，原因有兩方面：其一是反義RNA與miRNA結合后，序列很短，導致Dicer酶（細胞內(nèi)降解雙鏈RNA的主角）不能有效結合；其二是miRNA與Ago2以RISC復合物的形式存在，該復合物也會導致Dicer酶無法高效結合。因此，如果以反義RNA技術抑制miRNA功能，QPCR可以做，如果檢測出表達水平下降還好，即便未檢測到，也不表示抑制無效，正確的做法是直接檢測目的基因蛋白水平是否有上調(diào)。但若實驗者不清楚靶基因的情況下，不檢測到miRNA下調(diào)，心里是沒底的。瑞普信生物技術有限公司專業(yè)的第三方檢測Western Blot。西藏qPCR技術第三方檢測公司

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