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磷酸化蛋白的WB第三方檢測有哪些方法呢?50 度水浴 30min 后,用 TBST 洗 5 分鐘 ,3 次即可去除已孵育結(jié)合的抗體。許多人會建議 55 度水浴 30min。Strip solution 是用來去除已結(jié)合的抗體,但也會去除部分的蛋白,導致蛋白信號變?nèi)?。我本人?jīng)實驗發(fā)現(xiàn)水浴時有時溫度不穩(wěn)定,溫度定為 55 度時往往其溫度容易超過,導致較多的蛋白也被去除,故建議溫度設(shè)為 50 度 30min ,既能有效去除已結(jié)合的抗體,又比 55 度更能保護蛋白。Strip 時一定要注意: membrane 一定要完全泡在 strip solution 中(可用較硬的塑料膜封好),然后要完全浸入水中,使受熱均勻 。這一點很重要,要不然,隨后壓出來的總蛋白也好,內(nèi)標也好就會不均一,無法進行比較。我曾將同一張membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次,分別壓不同的抗體(因為有時候蛋白分子量很接近),效果都不錯。成都瑞普信生物技術(shù)有限公司第三方檢測國產(chǎn)試劑盒。四川免疫熒光抗體第三方檢測公司推薦
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