原代肝細(xì)胞是藥物早期研究的金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞模型。藥物通過(guò)肝臟代謝后，大多數(shù)藥物的毒性被消除，但同時(shí)也有一些無(wú)毒或低毒的物質(zhì)通過(guò)生物轉(zhuǎn)化后轉(zhuǎn)變成有毒甚至毒性更大的物質(zhì)，因此肝臟便必然成為研究藥物毒性的重要target organ。原代肝細(xì)胞即為一個(gè)較好的篩選模型，尤其是在檢測(cè)結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物時(shí)，原代肝細(xì)胞的角色更為重要。 人原代肝細(xì)胞是重要的體外模型。人原代肝細(xì)胞在較大程度上保留了細(xì)胞在體內(nèi)organ里的功能,各種物質(zhì)代謝功能和酶活性與體內(nèi)的肝細(xì)胞極其相似,是較為接近臨床的一種標(biāo)準(zhǔn)體外短期培養(yǎng)模型。人原代肝細(xì)胞通常從肝或肝組織中獲得,一般在肝切除手術(shù)中或者肝移植后排斥的肝組織中獲取,隨后即時(shí)進(jìn)行研究或者凍存待用。 原代肝細(xì)胞是肝臟疾病的研究以及相應(yīng)藥物的開(kāi)發(fā)的重要載體。比如一些對(duì)于乙肝病毒的研究需要對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)；一些嚴(yán)重肝臟疾病的細(xì)胞移植研究也要涉及到對(duì)原代肝細(xì)胞進(jìn)行大量擴(kuò)增。因此，原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)和研究是一直以來(lái)科學(xué)家們關(guān)注的熱點(diǎn)。貼壁原代肝細(xì)胞主要用于肝臟再生研究、肝臟3D打印、肝臟疾病研究、HBV、HCV病毒研究等。汕尾樹(shù)鼩原代肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長(zhǎng)的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)時(shí)可以呈單個(gè)細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)，胞體為圓形。其優(yōu)點(diǎn)是在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)，生存空間大，允許長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細(xì)胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細(xì)胞相互接觸后可抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，因此細(xì)胞不會(huì)相互重疊于其上面生長(zhǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營(yíng)養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定密度后，由于營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細(xì)胞分裂停止，稱為密度抑制。 當(dāng)肝細(xì)胞被分離后，可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在開(kāi)始的4~6h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而迅速下降，故懸浮肝細(xì)胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時(shí)間從損傷中恢復(fù)過(guò)來(lái)，保持了正常肝細(xì)胞的生物學(xué)特征及代謝活性，一般用于酶誘導(dǎo)研究、藥物細(xì)胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。天津比格犬原代肝細(xì)胞純化立沃生物原代肝細(xì)胞配套有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，對(duì)后續(xù)的細(xì)胞復(fù)蘇，培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)開(kāi)展提供有力的技術(shù)保障。
原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細(xì)胞培養(yǎng)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法，但在培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞可能會(huì)受到endotoxin的污染，這會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 endotoxin是一種由細(xì)菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，可以引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷。在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中，endotoxin可能來(lái)自于培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)器具或細(xì)胞本身。因此，需要采取一些措施來(lái)去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑，例如聚陽(yáng)離子樹(shù)脂（Polyclonal Cationic Resin，PCR）或聚乙烯醇（Polyvinyl Alcohol，PVA）。這些去除劑可以吸附endotoxin，從而減少其對(duì)細(xì)胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡(jiǎn)單，只需要將其加入培養(yǎng)基中，然后將細(xì)胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測(cè)試劑盒來(lái)檢測(cè)培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測(cè)結(jié)果顯示endotoxin含量較高，可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測(cè)試劑盒外，還可以采取一些預(yù)防措施來(lái)減少endotoxin的污染。例如，使用無(wú)菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過(guò)度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中必須注意的問(wèn)題。采取適當(dāng)?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
原代肝細(xì)胞的融合度是影響其生長(zhǎng)和增值能力的重要因素之一。當(dāng)融合度達(dá)到70%以上時(shí)，細(xì)胞開(kāi)始進(jìn)入高度同步狀態(tài)，細(xì)胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮，從而促進(jìn)了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。但是，如果融合度低于70%，細(xì)胞之間的相互作用就會(huì)受到限制，導(dǎo)致細(xì)胞的增值能力受到限制，無(wú)法達(dá)到100%。 此外，細(xì)胞之間的距離也是影響細(xì)胞生長(zhǎng)和增值能力的重要因素之一。當(dāng)細(xì)胞之間的距離剛好是黃金分割點(diǎn)時(shí)，細(xì)胞開(kāi)始進(jìn)入高度同步狀態(tài)，細(xì)胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮，從而促進(jìn)了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。但是，如果細(xì)胞之間的距離超過(guò)了黃金分割點(diǎn)，細(xì)胞就無(wú)法進(jìn)入高度同步狀態(tài)，從而導(dǎo)致細(xì)胞的增值能力受到限制。 細(xì)胞的培養(yǎng)密度也是影響細(xì)胞生長(zhǎng)和增值能力的重要因素之一。低密度培養(yǎng)雖然可以保持細(xì)胞的功能，但是細(xì)胞的增值能力會(huì)很快丟失。而高密度培養(yǎng)可以維持細(xì)胞的功能一段時(shí)間，但是也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞之間的相互作用受到限制，從而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。因此，在進(jìn)行原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)密度，以保證細(xì)胞的生長(zhǎng)和增值能力得到正常的發(fā)揮。原代肝細(xì)胞是從新鮮的肝臟組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。
原代肝細(xì)胞也被多方面應(yīng)用于嵌合體肝模型當(dāng)中。通過(guò)將正常人原代肝細(xì)胞移植到患有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的肝特異uPA轉(zhuǎn)基因小鼠中，可以成功地構(gòu)建嵌合體肝。而轉(zhuǎn)基因小鼠的uPA表達(dá)能夠促使鼠肝細(xì)胞死亡，從而為人原代肝細(xì)胞的移植、重建和增殖提供了一個(gè)適宜的微環(huán)境。在這種重建的嵌合體肝內(nèi)，人肝細(xì)胞占據(jù)了大約75％的比例，并且能夠持續(xù)高水平地表達(dá)人血清蛋白。通過(guò)使用病人血清和病毒核酸影響這種嵌合體小鼠，研究人員發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)可以檢測(cè)到病毒的RNA。然而，病理觀察并未發(fā)現(xiàn)病毒影響所導(dǎo)致的細(xì)胞病變。這一發(fā)現(xiàn)為研究病毒影響的機(jī)制提供了新的途徑，并為開(kāi)發(fā)解決病毒影響的新方法提供了新的思路。此外，這項(xiàng)研究還為研究肝細(xì)胞移植和重建提供了新的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｍㄟ^(guò)將人原代肝細(xì)胞移植到轉(zhuǎn)基因小鼠中，研究人員可以更好地研究原代肝細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和功能，從而為克服肝病提供新的思路和方法。這項(xiàng)研究的結(jié)果具有重要的臨床意義，有望為克服肝病和病毒影響提供新的策略。原代肝細(xì)胞作為體外藥物代謝研究的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在藥物代謝和毒理學(xué)研究中具有重要的意義。佛山新西蘭兔原代肝細(xì)胞懸浮
立沃生物的原代肝細(xì)胞配套提供完備的細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)，為客戶提供個(gè)性化的解決方案，使客戶滿意放心。汕尾樹(shù)鼩原代肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
原代肝細(xì)胞是肝臟研究和藥物研發(fā)的“金標(biāo)準(zhǔn)”細(xì)胞模型。原代肝細(xì)胞是從機(jī)體內(nèi)分離出來(lái)的肝細(xì)胞，經(jīng)過(guò)立即培養(yǎng)或凍存處理后得到的細(xì)胞。這種細(xì)胞保留了肝細(xì)胞原始的生理功能和分化狀態(tài)，因此被廣泛應(yīng)用于肝臟研究和藥物研發(fā)領(lǐng)域。相比于其他肝細(xì)胞模型，原代肝細(xì)胞具有更高的可靠性和生物學(xué)真實(shí)性，能夠更準(zhǔn)確地反映肝臟的生理和病理狀態(tài)。除此之外，原代肝細(xì)胞還具有良好的可塑性和可重復(fù)性，可以通過(guò)不同的處理方法來(lái)模擬不同的肝臟疾病和藥物反應(yīng)，為藥物研發(fā)提供了重要的參考和依據(jù)。因此，原代肝細(xì)胞被認(rèn)為是肝臟研究和藥物研發(fā)的“金標(biāo)準(zhǔn)”細(xì)胞模型，對(duì)于深入了解肝臟生理和病理機(jī)制，以及開(kāi)發(fā)更安全有效的藥物具有重要的意義。汕尾樹(shù)鼩原代肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)