廣州鴨原代肝細(xì)胞實驗

解決人工肝臟合成難題，原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源。目前，常用的肝細(xì)胞源有人原代肝細(xì)胞、動物原代肝細(xì)胞、liver cancer細(xì)胞系HepG2、HepaRG、永生化細(xì)胞以及干細(xì)胞等。其中，人原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源，因為它們具有完整的肝功能和生理特性，能夠更好地模擬人體肝臟的生理狀態(tài)。但是，由于人原代肝細(xì)胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實際應(yīng)用中受到了一定的限制。 相比之下，動物原代肝細(xì)胞則具有更好的增殖能力和更便捷的獲取方式，但是由于動物肝臟與人肝存在一定的差異，因此其在模擬人體肝臟生理狀態(tài)方面存在一定的局限性。HepG2和HepaRG則是常用的liver cancer細(xì)胞系，它們具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在致瘤風(fēng)險，因此在臨床應(yīng)用中需要謹(jǐn)慎使用。 永生化細(xì)胞則是通過基因工程技術(shù)將原代肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化為無限增殖的細(xì)胞系，如HepG2.2.15和Huh7等。這些細(xì)胞系具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在一定的局限性和風(fēng)險。 綜上所述，原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源，選擇合適的肝細(xì)胞源需要綜合考慮其功能、增殖能力、安全性等因素，以期達(dá)到想要的生物人工肝效果。人原代肝細(xì)胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實際應(yīng)用中受到了一定的限制。廣州鴨原代肝細(xì)胞實驗

原代肝細(xì)胞的3D培養(yǎng)是一種新興的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，它可以更好地模擬人體內(nèi)肝臟的生理環(huán)境，從而更準(zhǔn)確地研究肝臟疾病的發(fā)生機(jī)制。相比傳統(tǒng)的2D培養(yǎng)方式，3D培養(yǎng)可以提供更多的細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用，使細(xì)胞在培養(yǎng)過程中更加穩(wěn)定和健康。 在3D培養(yǎng)中，原代肝細(xì)胞被培養(yǎng)在一種類似于人體內(nèi)肝臟的三維結(jié)構(gòu)中，可以更好地模擬人體內(nèi)肝臟的生理環(huán)境。此外，3D培養(yǎng)還可以提供更多的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，使原代肝細(xì)胞在培養(yǎng)過程中更加穩(wěn)定和健康。 原代肝細(xì)胞的3D培養(yǎng)模型可以用于研究肝臟疾病的發(fā)生機(jī)制和治療方法，例如liver cancer、肝纖維化、肝硬化等。此外，它還可以用于藥物篩選和毒性測試，從而更好地評估藥物的安全性和有效性。 原代肝細(xì)胞的3D培養(yǎng)是一種具有廣闊應(yīng)用前景的新興細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，它可以更準(zhǔn)確地模擬人體內(nèi)肝臟的生理環(huán)境，為肝臟疾病的研究提供更加可靠的實驗?zāi)Ｐ?。北京樹鼩原代肝?xì)胞培養(yǎng)立沃生物的原代肝細(xì)胞提供多種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培訓(xùn)服務(wù)，包括細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培訓(xùn)、細(xì)胞培養(yǎng)實驗指導(dǎo)等。

    原代肝細(xì)胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上，原代肝細(xì)胞可貼壁培養(yǎng)，同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細(xì)胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細(xì)胞在體外的培養(yǎng)時間較短，人原代肝細(xì)胞在體外培養(yǎng)3天內(nèi)可保持乙肝病毒易感性，培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細(xì)胞凋亡情況。北京大學(xué)鄧宏魁教授發(fā)表在《科學(xué)》上的數(shù)據(jù)顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細(xì)胞去分化進(jìn)程，可在體外長期維持肝細(xì)胞的分化狀態(tài)，維持時間長達(dá)八周。那為什么原代肝細(xì)胞在體外容易去分化呢？肝細(xì)胞在體外缺乏了肝細(xì)胞與肝非實質(zhì)細(xì)胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結(jié)構(gòu)?；谝陨蠁栴}與分析，我在碩士期間開展了肝細(xì)胞與肝非實質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)工作。結(jié)果顯示，通過共培養(yǎng)，原代肝細(xì)胞可在體外長期培養(yǎng)，并在鋪板后的72天內(nèi)仍然保持了乙肝病毒的易感性，說明缺乏細(xì)胞間交流是原代肝細(xì)胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止，原代肝細(xì)胞體外維持四個月的時間記錄仍然沒有被打破。

近年來，隨著細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，原代肝細(xì)胞在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用的作用越來越重要，取得了一系列重要進(jìn)展。首先，原代肝細(xì)胞在肝臟發(fā)育和肝臟再生方面的研究中發(fā)揮了重要作用。研究表明，原代肝細(xì)胞可以分化為多種肝細(xì)胞類型，如肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞和星形細(xì)胞等，從而為肝臟發(fā)育和再生提供了重要的細(xì)胞來源。此外，原代肝細(xì)胞還可以通過體外培養(yǎng)和移植等方法促進(jìn)肝臟再生和修復(fù)。其次，原代肝細(xì)胞在肝臟疾病的研究中也有重要應(yīng)用。研究表明，原代肝細(xì)胞可以模擬肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，如肝纖維化、livercancer等，從而為疾病的機(jī)制研究和新藥開發(fā)提供了重要的實驗?zāi)Ｐ?。此外，原代肝?xì)胞還可以用于篩選和評價肝臟疾病的藥物開發(fā)。原代肝細(xì)胞在藥物代謝和毒性研究中也有重要作用。研究表明，原代肝細(xì)胞可以模擬肝臟對藥物的代謝和毒性反應(yīng)，從而為藥物的安全性評價和藥代動力學(xué)研究提供了重要的實驗?zāi)Ｐ?。此外，原代肝?xì)胞還可以用于篩選和評價藥物的代謝和毒性。原代肝細(xì)胞在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用前景廣闊，將為肝臟生理和病理的研究以及藥物開發(fā)和安全性評價等方面提供重要支持。原代肝細(xì)胞是一種從新鮮肝臟組織中分離出來的細(xì)胞，高度保留了肝臟本身的酶水平和功能。。

原代肝細(xì)胞是簡單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝臟細(xì)胞或是cancer細(xì)胞系，原代肝細(xì)胞在造模的同時不需要復(fù)雜的對細(xì)胞進(jìn)行重編程，以及誘導(dǎo)分化，可以更方便更快速的進(jìn)行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細(xì)胞能夠更準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)的真實情況，有數(shù)據(jù)表明，原代肝細(xì)胞比iPSC誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝細(xì)胞內(nèi)的堿基取代少數(shù)倍，同時這些細(xì)胞還保留了捐獻(xiàn)者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個優(yōu)勢在于，原代肝細(xì)胞衍生的Organoid可以提供獨特的肝毒模型，因為原代細(xì)胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細(xì)胞不僅擁有捐贈者特有的生理特性，同時也具備其他兩種肝細(xì)胞在應(yīng)對病原體時的生理反應(yīng)。目前，分離原代肝細(xì)胞的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。浙江人體原代肝細(xì)胞分離

原代肝細(xì)胞冷凍復(fù)蘇后若用于懸浮培養(yǎng)，由于失巢凋亡一般壽命是12小時左右，而貼壁肝細(xì)胞可以存活達(dá)15天。廣州鴨原代肝細(xì)胞實驗

原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細(xì)胞懸浮生長時可以呈單個細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)，胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長，生存空間大，允許長時間生長，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細(xì)胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細(xì)胞相互接觸后可抑制細(xì)胞的運動，因此細(xì)胞不會相互重疊于其上面生長。細(xì)胞生長、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定密度后，由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細(xì)胞分裂停止，稱為密度抑制。 當(dāng)肝細(xì)胞被分離后，可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在開始的4~6h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致，隨時間的延長而迅速下降，故懸浮肝細(xì)胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時間從損傷中恢復(fù)過來，保持了正常肝細(xì)胞的生物學(xué)特征及代謝活性，一般用于酶誘導(dǎo)研究、藥物細(xì)胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。廣州鴨原代肝細(xì)胞實驗