原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細(xì)胞培養(yǎng)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法，但在培養(yǎng)過程中，細(xì)胞可能會(huì)受到endotoxin的污染，這會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 endotoxin是一種由細(xì)菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，可以引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷。在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中，endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)器具或細(xì)胞本身。因此，需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑，例如聚陽離子樹脂（Polyclonal Cationic Resin，PCR）或聚乙烯醇（Polyvinyl Alcohol，PVA）。這些去除劑可以吸附endotoxin，從而減少其對(duì)細(xì)胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡單，只需要將其加入培養(yǎng)基中，然后將細(xì)胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測試劑盒來檢測培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測結(jié)果顯示endotoxin含量較高，可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測試劑盒外，還可以采取一些預(yù)防措施來減少endotoxin的污染。例如，使用無菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當(dāng)?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。原代肝細(xì)胞可以用于新藥研發(fā)企業(yè)有關(guān)藥物代謝、毒理、靶向誘導(dǎo)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，是有效的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。廣東魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法
原代肝細(xì)胞是簡單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝臟細(xì)胞或是cancer細(xì)胞系，原代肝細(xì)胞在造模的同時(shí)不需要復(fù)雜的對(duì)細(xì)胞進(jìn)行重編程，以及誘導(dǎo)分化，可以更方便更快速的進(jìn)行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細(xì)胞能夠更準(zhǔn)確的反應(yīng)體內(nèi)的真實(shí)情況，有數(shù)據(jù)表明，原代肝細(xì)胞比iPSC誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝細(xì)胞內(nèi)的堿基取代少數(shù)倍，同時(shí)這些細(xì)胞還保留了捐獻(xiàn)者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于，原代肝細(xì)胞衍生的Organoid可以提供獨(dú)特的肝毒模型，因?yàn)樵?xì)胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細(xì)胞不僅擁有捐贈(zèng)者特有的生理特性，同時(shí)也具備其他兩種肝細(xì)胞在應(yīng)對(duì)病原體時(shí)的生理反應(yīng)。汕尾鮭魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)立沃生物的原代肝細(xì)胞可提供不同狀態(tài)的細(xì)胞，如貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等，滿足客戶基于使用場景的個(gè)性化需求。
在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如何檢測污染情況？在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)過程中，檢測污染情況是非常重要的，可以通過以下幾種方法進(jìn)行檢測：1.肉眼觀察：通過肉眼觀察培養(yǎng)物的外觀、顏色、透明度等是否異常，如果出現(xiàn)渾濁、變色、沉淀等異常情況，可能是污染所致。2.顯微鏡觀察：使用顯微鏡觀察培養(yǎng)物中的細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量、分布等是否異常，如果出現(xiàn)細(xì)胞變形、破裂、死亡等異常情況，可能是污染所致。3.細(xì)菌培養(yǎng)：將培養(yǎng)物接種到細(xì)菌培養(yǎng)基中，觀察是否有細(xì)菌生長，如果有細(xì)菌生長，說明培養(yǎng)物受到了細(xì)菌污染。：使用PCR技術(shù)檢測培養(yǎng)物中的細(xì)菌、病毒等微生物的DNA，如果檢測到DNA存在，說明培養(yǎng)物受到了污染。總之，在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需要定期進(jìn)行污染檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理污染，以保證培養(yǎng)物的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
原代肝細(xì)胞可以用于乙肝病毒的對(duì)照試驗(yàn)。為探究不同類型肝細(xì)胞對(duì)乙型肝炎病毒（HBV）的影響，以及不同藥物和生物學(xué)處理對(duì)HBV的影響，可以選擇了人原代肝細(xì)胞（PHH）樹鼩原代肝細(xì)胞（PTH）、hNTCP穩(wěn)定表達(dá)豬肝細(xì)胞（PPH-hNTCP）和hNTCP穩(wěn)定表達(dá)liver cancer細(xì)胞系（Huh7D-hNTCP）作為研究對(duì)象。 采用HBV模型，將不同類型肝細(xì)胞融合HBV，并進(jìn)行藥物處理和生物學(xué)處理。藥物處理包括小分子化合物和中藥提取物等，生物學(xué)處理包括過表達(dá)、敲除siRNA和shRNA等。通過對(duì)處理后的細(xì)胞進(jìn)行評(píng)價(jià)，可以了解不同藥物和生物學(xué)處理對(duì)HBV的影響。 這種研究方法的意義在于探究不同類型肝細(xì)胞對(duì)HBV的影響，為研究HBV的機(jī)制提供重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。同時(shí)，本研究還可以為開發(fā)新型抗HBV藥物提供參考，為臨床克服乙型肝炎提供新的思路和方法。立沃生物的原代肝細(xì)胞可以配套提供多種細(xì)胞凍存設(shè)備支持，包括程序降溫儀，低溫液氮罐等。
解決人工肝臟合成難題，原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源。目前，常用的肝細(xì)胞源有人原代肝細(xì)胞、動(dòng)物原代肝細(xì)胞、liver cancer細(xì)胞系HepG2、HepaRG、永生化細(xì)胞以及干細(xì)胞等。其中，人原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源，因?yàn)樗鼈兙哂型暾母喂δ芎蜕硖匦裕軌蚋玫啬M人體肝臟的生理狀態(tài)。但是，由于人原代肝細(xì)胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實(shí)際應(yīng)用中受到了一定的限制。 相比之下，動(dòng)物原代肝細(xì)胞則具有更好的增殖能力和更便捷的獲取方式，但是由于動(dòng)物肝臟與人肝存在一定的差異，因此其在模擬人體肝臟生理狀態(tài)方面存在一定的局限性。HepG2和HepaRG則是常用的liver cancer細(xì)胞系，它們具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在致瘤風(fēng)險(xiǎn)，因此在臨床應(yīng)用中需要謹(jǐn)慎使用。 永生化細(xì)胞則是通過基因工程技術(shù)將原代肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化為無限增殖的細(xì)胞系，如HepG2.2.15和Huh7等。這些細(xì)胞系具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在一定的局限性和風(fēng)險(xiǎn)。 綜上所述，原代肝細(xì)胞是理想的肝細(xì)胞源，選擇合適的肝細(xì)胞源需要綜合考慮其功能、增殖能力、安全性等因素，以期達(dá)到想要的生物人工肝效果。原代肝細(xì)胞冷凍復(fù)蘇后若用于懸浮培養(yǎng)，由于失巢凋亡一般壽命是6小時(shí)左右，而貼壁肝細(xì)胞可以存活達(dá)15天。東莞羅非魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)步驟
立沃生物原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)合作服務(wù)，包括細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)合作、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目合作等。廣東魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法
貼壁培養(yǎng)是一種常用的細(xì)胞培養(yǎng)方法，可以使原代肝細(xì)胞在培養(yǎng)皿表面附著生長，形成單層細(xì)胞群落。原代肝細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)需要注意以下幾點(diǎn)： 1. 分離和準(zhǔn)備細(xì)胞：從新鮮的動(dòng)物肝臟中分離出原代肝細(xì)胞后，需要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量檢測，確保細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量符合要求。 2. 培養(yǎng)基的選擇：原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)基需要選擇適合其生長和代謝的培養(yǎng)基，常用的培養(yǎng)基包括DMEM、RPMI-1640等。 3. 培養(yǎng)皿的涂層：為了使原代肝細(xì)胞能夠附著生長，需要在培養(yǎng)皿表面涂層一定濃度的膠原蛋白、明膠或者其他細(xì)胞黏附因子。 4. 細(xì)胞接種和培養(yǎng)：將準(zhǔn)備好的原代肝細(xì)胞接種到涂層好的培養(yǎng)皿中，加入適量的培養(yǎng)基，放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。需要注意的是，原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間較短，一般在3-5天左右，因此需要及時(shí)更換培養(yǎng)基和進(jìn)行細(xì)胞觀察。 原代肝細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)可以通過在培養(yǎng)皿上加一定的的吸附涂層來達(dá)到讓原代肝細(xì)胞快速貼壁的效果。廣東魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法