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2020年,TonmoyChakraborty等人提出了加速2PM軸向掃描速度的方法[2]。在光學(xué)顯微鏡中,物鏡或樣品緩慢的軸向掃描速度限制了體成像的速度。近年來,通過使用遠(yuǎn)程聚焦技術(shù)或電調(diào)諧透鏡(ETL)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了快速軸向掃描。但遠(yuǎn)程對焦時對反射鏡的機(jī)械驅(qū)動會限制軸向掃描速度,ETL會引入球差和高階像差,無法進(jìn)行高分辨率成像。為了克服這些限制,該小組引入了一種新的光學(xué)設(shè)計(jì),可以將橫向掃描轉(zhuǎn)換為無球面像差的軸向掃描,以實(shí)現(xiàn)高分辨率成像。有兩種方法可以實(shí)現(xiàn)這種設(shè)計(jì)。***個可以執(zhí)行離散的軸向掃描,另一個可以執(zhí)行連續(xù)的軸向掃描。如圖3a所示,特定裝置由兩個垂直臂組成,每個臂具有4F望遠(yuǎn)鏡和物鏡。遠(yuǎn)程聚焦臂由振鏡掃描鏡(GSM)和空氣物鏡(OBJ1)組成,另一個臂(稱為照明臂)由浸沒物鏡(OBJ2)組成。兩個臂對齊,使得GSM與兩個物鏡的后焦平面共軛。準(zhǔn)直后的激光束經(jīng)偏振分束器反射進(jìn)入遠(yuǎn)程聚焦臂,由GSM進(jìn)行掃描,使OBJ1產(chǎn)生的激光焦點(diǎn)可以進(jìn)行水平掃描。點(diǎn)掃描多光子顯微鏡可以深入樣本并捕捉高質(zhì)量的圖像,但這個過程極其緩慢,因?yàn)閳D像是一次形成一個點(diǎn)。美國進(jìn)口多光子顯微鏡代理商
細(xì)胞在受到外界刺激時,隨著刺激時間的增長,即使刺激繼續(xù)存在,Ca2+熒光信號不但不會繼續(xù)增強(qiáng),反而會減弱,直至恢復(fù)到未加刺激物時的水平。對于細(xì)胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化情況,研究發(fā)現(xiàn),配了在粘著過程中,Ca2+熒光信號未發(fā)生任何變化,而配子之間發(fā)生融合作用時,Ca2+熒光信號強(qiáng)度卻會出現(xiàn)一個不穩(wěn)定的峰值,并可持續(xù)幾分鐘。這些現(xiàn)象,對研究受精發(fā)育的早期信號及Ca2+在卵細(xì)胞和受精卵的發(fā)育過程中的作用具有重要的意義。在其它一些生理過程如細(xì)胞分裂、胞吐作用等等,Ca2+熒光信號強(qiáng)度也會發(fā)生很強(qiáng)的變化。美國嚙齒類多光子顯微鏡設(shè)備使用雙光子顯微鏡觀察標(biāo)本的時候,只有在焦平面上才有光漂白和光毒性。
雙光子熒光顯微成像主要有以下優(yōu)點(diǎn):a.光損傷小:雙光子熒光顯微以可見光或近紅外光為激發(fā)光,對細(xì)胞和組織的光損傷小,適合長期研究;b.穿透力強(qiáng):與紫外光、可見光或近紅外光相比,穿透力強(qiáng),可用于生物樣品的深入研究;c.高分辨率:由于雙光子吸收截面很小P,熒光只能在焦平面很小的區(qū)域激發(fā),雙光子吸收被限制在焦點(diǎn)λ左右的體積內(nèi);d.漂白區(qū)域很小,焦點(diǎn)外不發(fā)生漂白。E.高熒光收集率與共焦成像相比,雙光子成像不需要濾光片,提高了熒光收集率。采集效率的提高直接導(dǎo)致圖像對比度的提高。F.對探測光路要求低。由于激發(fā)光和發(fā)射熒光的波長差越來越大,加上自發(fā)三維濾波效應(yīng),多光子顯微鏡對光路采集系統(tǒng)的要求遠(yuǎn)低于單光子共焦顯微鏡,光學(xué)系統(tǒng)也相對簡單。G.適用于多標(biāo)簽復(fù)合測量許多染料熒光探針的多光子激發(fā)光譜比單光子激發(fā)光譜更寬,從而可以用單一波長的激發(fā)光同時激發(fā)多種染料,獲得同一生命現(xiàn)象的不同信息,便于相互比較和補(bǔ)充。
某種物質(zhì)能產(chǎn)生熒光,首要條件是分子必須具有吸收的結(jié)構(gòu),即生色團(tuán)(分子中具有吸收特征頻率的光能的基團(tuán))。其次,該物質(zhì)必須具有一定的量子產(chǎn)率和適宣的環(huán)境。我們把分子中發(fā)射熒光的基團(tuán)稱為熒光團(tuán)。熒光團(tuán)一定是生色團(tuán),但生色團(tuán)不一定是熒光團(tuán)。因?yàn)椋绻珗F(tuán)的量子產(chǎn)率等于零,就不能發(fā)射出熒光,處于激發(fā)態(tài)的分子,可以由許多方式(如熱,碰撞)把能量釋放出來,發(fā)射熒光只是其中的一種方式。此外,一種物質(zhì)吸收光的能力及量子產(chǎn)率又與物質(zhì)所處的環(huán)境密切相關(guān)。帶寬足以覆蓋鈦藍(lán)寶石激光器的可調(diào)諧范圍和用于多光子顯微鏡的許多其它激光器的典型中心頻率。
多光子激光掃描顯微鏡行業(yè)發(fā)展,世界多光子激光掃描顯微鏡產(chǎn)業(yè)主要布局在德國和日本,德國是以徠卡顯微系統(tǒng)和蔡司為,而日本以尼康和奧林巴斯公司為,2020年,上述企業(yè)占據(jù)著世界多光子激光掃描顯微鏡市場64.44%的市場份額,其發(fā)展戰(zhàn)略左右著多光子激光掃描顯微鏡市場的走向。目前世界市場對多光子激光掃描顯微鏡的需求在增長,中國市場這方面的需求增長更快,未來五年多光子激光掃描顯微鏡市場的發(fā)展在中國將具有很大的發(fā)展?jié)摿?。全球多光子顯微鏡主要消費(fèi)地區(qū)分析,包括消費(fèi)量及份額等。Ultima 2P Plus多光子顯微鏡系統(tǒng)
多光子顯微鏡能提供多種對比度機(jī)制。美國進(jìn)口多光子顯微鏡代理商
當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時,隨著刺激時間的增加,即使繼續(xù)刺激,Ca2+熒光信號也不會繼續(xù)增強(qiáng),反而會減弱,直至恢復(fù)到無刺激時的水平。對于細(xì)胞受精過程中Ca2+熒光信號的變化,發(fā)現(xiàn)粘附過程中Ca2+熒光信號沒有變化,但當(dāng)配子融合時,Ca2+熒光信號強(qiáng)度出現(xiàn)一個不穩(wěn)定的峰值,持續(xù)數(shù)分鐘。這些現(xiàn)象對于研究受精發(fā)育的早期信號以及Ca2+在卵子和受精卵發(fā)育中的作用具有重要意義。在其他生理過程中,如細(xì)胞分裂和胞吐,Ca2+熒光信號的強(qiáng)度也會發(fā)生很大的變化。美國進(jìn)口多光子顯微鏡代理商