廣東數(shù)字PCR市場前景

dPCR的測量結果通常表示為含量，即拷貝數(shù)值或轉基因質(zhì)量百分比，而QPCR結果通常表示為拷貝數(shù)的質(zhì)量分數(shù)。目前市場上可購買到大多數(shù)轉基因標準物質(zhì)，以qPCR定值的標準物質(zhì)是以拷貝數(shù)（單倍體基因組當量）的質(zhì)量分數(shù)來表示特性量；以dPCR定值的標準物質(zhì)直接采用拷貝數(shù)比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會造成測量結果不可比。因此質(zhì)量分數(shù)、拷貝數(shù)和拷貝數(shù)比例之間的關系需要轉化，才能得到單位一致，數(shù)值可比的數(shù)據(jù)。EU聯(lián)合研究中心建議使用轉換因子從拷貝數(shù)換算到質(zhì)量分數(shù)。dPCR的結果統(tǒng)計方式有2種，一種是采用標記多種顏色，另一種采用概率統(tǒng)計的數(shù)據(jù)處理方法。廣東數(shù)字PCR市場前景

在熒光定量PCR應用已經(jīng)如此的情況下，緣何數(shù)字PCR仍然能橫空出世？中心點在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場應用提供了非常重要的檢測工具支撐，但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標準品制作的標準曲線進行定量，屬于相對定量，操作較為復雜，且終端用戶對其結果的重復性、靈敏性、精密度、分辨率、對PCR反應抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數(shù)字PCR通過將反應體系進行有限稀釋至成千上萬的反應單元中，實現(xiàn)了核酸靶標的單分子擴增。PCR擴增結束后，基于終點法對陽性液滴數(shù)和總液滴數(shù)進行計數(shù)，結合泊松分布原理，從而實現(xiàn)對起始樣本的定量。其極大地簡化了操作步驟，并且大幅提高了檢測性能，尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測上（靈敏性可達0.001-0.0001%），其優(yōu)異的性能得到了終端用戶的認可。珠三角全自動數(shù)字PCR數(shù)字PCR主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法。

數(shù)字PCR技術流分類目前，dPCR的基本方法都已經(jīng)建立，根據(jù)反應單元的不同形式，主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統(tǒng)。微液滴制備的方法，目前主流的有四種：1）芯片微孔物理分割法，俗稱物理分隔法，公司有Fluidgm，Qiagen，Roche，ThermoFisher，;2）液滴分割法，俗稱油包水，代替公司有Bio-Rad;3）雜交式芯片液滴法，公司有Stilla;4）注射振動制滴法。PS：芯片式物理分割技術所有已經(jīng)過期，目前有不少公司在這個技術的基礎上進行開發(fā)，例如羅氏。

數(shù)字聚合酶鏈式反應（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢而被廣用于轉基因食品檢測。本研究綜述了數(shù)字PCR技術的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢，梳理了數(shù)字PCR技術在轉基因檢測與溯源技術（標準物質(zhì)）方面的進展和發(fā)展趨勢，以期為轉基因食品檢測領域提供參考依據(jù)。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴增和樣品的檢測。對于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個部件之間仍然有較大的改進空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價值。表1中總結了部分常見的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。在dPCR中，樣品被分區(qū)，使得樣品內(nèi)單個的核酸分子被定位并被集中在許多分離的區(qū)域內(nèi)。

數(shù)字PCR系統(tǒng)的分散方式?jīng)Q定了分散數(shù)量，其結果基于統(tǒng)計的方法進行定量，增加反應單元數(shù)量（統(tǒng)計樣本量），可以增加其檢測的容量和動態(tài)檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態(tài)范圍，同時減小一個反應單元中包含多個分子所造成的誤差，達到提高靈敏度和準確度。影響dPCR定量結果的因素包括：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結果表達方式。分散方式與數(shù)量由數(shù)字PCR系統(tǒng)決定，分散體積和結果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優(yōu)化得到。國產(chǎn)dPCR企業(yè)在上述應用領域不斷與伯樂、賽默飛、羅氏、凱杰、因美納等頭部企業(yè)展開競爭，搶占市場份額。深圳全自動數(shù)字PCR市場前景

dPCR可直接溯源SI國際單位制摩爾，適合單一、雙重及多重轉基因標準物質(zhì)研究，一次可識別不同的轉基因區(qū)域。廣東數(shù)字PCR市場前景

了解泊松分布，我們先要從二項式分布說起，二項式分布是一個離散概率分布，它給出了m次試驗中k次成功的可能性，每次試驗的概率為p，例如當擲骰子時，二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數(shù)字PCR的情況中，投擲骰子類似于將一個目標實體隨機“投擲”到一組分區(qū)中，當目標落在選定的分區(qū)中時，就是成功。如果有n個分區(qū)，并且分區(qū)過程是完全隨機的，則目標出現(xiàn)在所選分區(qū)中的概率為1/n。該試驗重復m次，樣品中的每個分子一次。如下所示的二項式分布給出了k個成功的概率，即所選分區(qū)恰好包含k個分子的概率。數(shù)字PCR通常采用大量分區(qū)。當n很大，并且嘗試成功的概率(1/n)很小時，二項分布可以近似為泊松分布。廣東數(shù)字PCR市場前景

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