微滴),包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的DNA模板),這是與PCR或qPCR反應的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個反應體系中進行,而數(shù)字PCR在每個反應單元(微滴)中都會對目標分子進行擴增,擴增結(jié)束后統(tǒng)計熒光信號并分析。數(shù)字PCR檢測其實離我們越來越近,下面我們以幾個臨床案例研究來舉例,展示數(shù)字PCR巨大的臨床應用前景。1).個體化診療通過檢測T790M位點突變情況,可以更好地評估一代TKI藥物的療效及耐藥情況并指導第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了無與倫比的檢測精度,此外,dPCR定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。2.)基因表達分析伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細胞白血?。–ML)患者延長生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行測定,結(jié)果檢測下限可以達到,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢[2]。 PCR儀是分子生物學相關(guān)實驗的常規(guī)儀器。上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
談談數(shù)字PCR那些事數(shù)字PCR即DigitalPCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術(shù)。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的定量。1、PCR之數(shù)字PCR技術(shù)發(fā)展歷程在定量PCR時,我們常常糾結(jié)一個問題,究竟是相對定量還是定量呢?如今,你無需糾結(jié)了,因為數(shù)字PCR(digitalPCR)來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領(lǐng)域:拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。Nacia數(shù)字PCR2、數(shù)字PCR之dPCR檢測原理數(shù)字PCR即DigitalPCR(dPCR)是這幾年才迅速發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù),雖然出生的晚,但是潛力不小,因為數(shù)字PCR解決了qPCR這么多年懸而未決的問題,那就是不依賴于標準曲線的定量并且可以將檢測靈敏度提高至單個核酸分子。那它是怎么做到的呢?這要從它的檢測原理說起。Nacia數(shù)字PCR數(shù)字PCR通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,分配到不同的反應單元。 上海力康實時熒光PCR儀生產(chǎn)廠家DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。
血友病是一組**為常見的遺傳性凝血障礙,根據(jù)因子缺陷的不同分為甲、乙兩型,(Ⅷ、Ⅸ因子缺陷),也有復合型血友病,但不常見。甲型血友病發(fā)病率為1/10000,Ⅷ因子基因位于G6PD基因附近,全長186Kb,大范圍的基因重排(缺失、插入、重復)導致甲型血友病的病例很少,*為Ⅷ因子缺陷的5%,大部分病人表現(xiàn)為單個或少數(shù)堿基的突變。由于Ⅷ因子基因長度為186Kb,突變位點多,而且新生突變頻率高,從臨床角度講不能對每一個突變都檢測,可對**為常見的幾種突變類型進行檢測,主要的檢測手段是PCR結(jié)合RELP分析。乙型血友病發(fā)病率占血友病的20%,其基因變化及檢測方法與甲型血友病類似。區(qū)別雄性及雌性的物質(zhì)基礎是性染色體,哺乳動物胚胎發(fā)育中,雌性表型不需要任何調(diào)節(jié),而雄性表型則由多因素決定,位于Y染色體上的指導雄性性別分ss化的基因命名為睪丸決定因子(TDF)?,F(xiàn)代研究表明,SRY(Sex-determiningregionofYchromosome)基因是TDF基因,位于Y染以體短臂末端。SRY區(qū)缺失易導致46XY核型個體發(fā)育成女性。進行基因檢測可以檢出SRY基因組的易位及缺失,從而診斷性別發(fā)育異常,這一探索性別異常的研究非常熱門。另外還有一種46XY核型異常的病人即睪丸女性化,這是用于雄***受體。
移動箱式PCR實驗室嚴格按照生物安全實驗室的標準建造,配備有各類儀器設備,注重保障實驗人員安全,同時具備機動靈活、反應迅速等特點,協(xié)助前線醫(yī)院開展檢測工作,為防控奉獻綿薄之力。由于集裝箱在出廠前已經(jīng)完成了單個箱體里面配置的所有安裝,水、電、風、廢水和廢氣排放等系統(tǒng)已經(jīng)在箱體配備,同時保證了外面環(huán)境的安全。在現(xiàn)場基礎平整的條件下,只需要簡單的進行箱體吊裝安放、給水和用電對接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時運行,真正做到組裝迅速。對接安裝本身不需要非常專業(yè)的人員,常規(guī)的疾控維修人員或工程人員就可以完成對接。箱體安放位置一般在室外,對于病人的隔離或控制病毒擴散都是有利的。室外空氣流通快,不會像室內(nèi)空氣那樣高度聚集及停留產(chǎn)生氣溶膠導致病毒擴散的風險加大,箱式PCR實驗室有效的避免了聚集性和傳染性,當箱式PCR實驗室內(nèi)部環(huán)境受到污染時,可以快速通過送排風系統(tǒng)置換新鮮的空氣達到實驗室凈化的要求。箱式PCR實驗室可以重復使用,當結(jié)束以后,經(jīng)過專業(yè)人員的消毒,可以重新運到疾控中心、醫(yī)院、港口或者第三方檢測等單位再次使用,也可經(jīng)過專業(yè)存放和維護,待需要時重新投入使用。PCR實驗室又叫“基因擴增實驗室”,根據(jù)規(guī)定需有生物安全柜等防護設備及熒光定量PCR儀等檢測設備。
力康GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀),基于WindowsCE智能化操作系統(tǒng),具備多達100余項故障自診斷功能。 連接互聯(lián)網(wǎng),用戶可通過IE瀏覽器登錄力康官網(wǎng)的下載中心進行版本更新,完成PCR儀的遠程維護、診斷和數(shù)據(jù)交換, 提高了工作效率。GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀)支持觸摸和鼠標操作,可外接移動U盤,打破傳統(tǒng)PCR儀的按鍵式操作模式,使得編寫程序及操作更加靈活方便。GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀)率先在行業(yè)領(lǐng)域引入物聯(lián)網(wǎng)概念,具備新一代的信息技術(shù),以互聯(lián)網(wǎng)為基礎,實現(xiàn)網(wǎng)絡的延伸與拓展,以一臺上位機(PC)為主機,可連接多達200臺下位機(GM05智能梯度基因擴增儀/控溫儀)。只要樣本有一個病原體存在,PCR就可以檢測到。國產(chǎn)實驗室PCR儀價格信息
熒光定量PCR儀是以熒光染料或熒光標記探針偵測每次聚合酶鏈鎖反應(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量。上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
基本的PCR須具備:1.要被復制的DNA模板2.界定復制范圍兩端的引物(四種脫氧核苷酸)及水。利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。PCR的設想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù),Korana于1971年提出核酸體外擴增的設想:“經(jīng)過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發(fā)明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應。其原理類似于DNA的體內(nèi)復制。Mullis使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺點是:①Klenow酶不耐高溫,90℃會變性失活,每次循環(huán)都要重新加。②引物鏈延伸反應在37℃下進行,容易發(fā)生模板和引物之間的堿基錯配,其PCR產(chǎn)物特異性較差,合成的DN段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術(shù)雖較傳統(tǒng)的基因擴增具備許多突出的優(yōu)點,但由于Klenow酶不耐熱,在DNA模板進行熱變性時,會導致此酶鈍化,每加入一次酶只能完成一個擴增反應周期,給PCR技術(shù)操作程序添了不少困難。這使得PCR技術(shù)在一段時間內(nèi)沒能引起生物醫(yī)學界的足夠重視。 上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
力新儀器(上海)有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才,以不斷增強企業(yè)重點競爭力,加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,實現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營。力新儀器(上海)有限公司主營業(yè)務涵蓋數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設備,ICU重癥產(chǎn)品,堅持“質(zhì)量保證、良好服務、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務,我們相信誠實正直、開拓進取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經(jīng)過幾年的發(fā)展,已成為數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設備,ICU重癥產(chǎn)品行業(yè)出名企業(yè)。