PCR基因擴(kuò)增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用，遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機(jī)體某一功能或缺陷或異常所致的疾病，其根本變化在于遺傳物質(zhì)。地中海貧血（Thalassemia）是一種遺傳性慢性溶血性貧血病，是世界上常見且發(fā)病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發(fā)病率較高，在廣西等地高達(dá)15%。地中海貧血是由于基因突變?cè)斐芍榈鞍椎牟黄胶?，使結(jié)構(gòu)正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現(xiàn)為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等，其中以α、β地貧為常見，危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號(hào)染色短臂上，有兩個(gè)重復(fù)基因基因位于α1、α2、兩個(gè)α基因及其旁側(cè)序列有很大的同源性，易出現(xiàn)染色體不等交換，導(dǎo)致α基因缺失－α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時(shí)缺失及非缺失型地貧?？梢詰?yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增α1、α2基因從而檢測(cè)這些基因是否缺失、突變等，從而對(duì)α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現(xiàn)為基因序列中單一核苷酸的突變，或少數(shù)堿基的缺失、插入，使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應(yīng)用位點(diǎn)特異性寡核苷探針（Aso）進(jìn)行PCR產(chǎn)物斑點(diǎn)雜交即可對(duì)其作出診斷。 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。國(guó)產(chǎn)基因擴(kuò)增PCR儀生產(chǎn)廠家
1993年，美國(guó)科學(xué)家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。PCR，中文譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其實(shí)是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù)，其擴(kuò)增效率之高就象核裂變的“鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”那樣。PCR技術(shù)通過兩個(gè)短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用，可以在3個(gè)小時(shí)內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術(shù)一問世，立刻引起了分子生物學(xué)研究的一場(chǎng)**，人們利用這種轟動(dòng)全世界的技術(shù)很快就把微觀領(lǐng)域的生物學(xué)研究地往前推了一步?？梢赃@么說，PCR技術(shù)使分子生物學(xué)研究一下子獲得了突破，而且隨著PCR技術(shù)的日趨完善，PCR在人類社會(huì)生活中的應(yīng)用也越來越。比如說在“DNA指紋”中我們提到，科學(xué)家們只需要一根頭發(fā)甚至一個(gè)細(xì)胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作，這里實(shí)際上就要采用PCR技術(shù)，因?yàn)橐粋€(gè)細(xì)胞中的DNA含量實(shí)在太少了，人們根本不可能檢測(cè)到它的指紋；有了PCR技術(shù)就好辦了，通過PCR技術(shù)把這個(gè)細(xì)胞中的DN斷擴(kuò)增1000萬倍，這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如，在醫(yī)院里檢驗(yàn)血液中的某種病毒，有時(shí)病毒量極少（例如病毒攜帶者），通過傳統(tǒng)的檢查方法費(fèi)力又費(fèi)時(shí)，這時(shí)PCR技術(shù)也許就可以幫上忙?？梢韵冗x定這種病毒DNA上的一段DNA，設(shè)計(jì)合適的引物DNA。 上海力康梯度PCR儀價(jià)格便宜通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，加入設(shè)計(jì)引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。
并含有能用于探針捕捉雜交實(shí)驗(yàn)的足夠信息。這一長(zhǎng)度范圍的產(chǎn)物可以通過采用兩步擴(kuò)增循環(huán)方法得到，從而減少擴(kuò)增時(shí)間。其他PCR方法有不同的佳產(chǎn)物長(zhǎng)度。例如，通過定量的RNA-PCR檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)，產(chǎn)物應(yīng)該足夠大以便構(gòu)成競(jìng)爭(zhēng)性模板，這樣，產(chǎn)物和競(jìng)爭(zhēng)物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來。這些產(chǎn)物一般在250～750bp范圍內(nèi)。⑦補(bǔ)充說明若在cDNA序列內(nèi)找尋PCR引物，需特別注意兩點(diǎn)：首先，盡力將引物和產(chǎn)物保持在mRNA的編碼區(qū)域內(nèi)，因?yàn)檫@是生成蛋白質(zhì)的獨(dú)特序列，不像3’末端非編碼區(qū)域與許多其他mRNA有同源性；第二，盡力把引物放在不同的外顯子上，以便使RNA特異的PCR產(chǎn)物與從污染DNA中產(chǎn)生的產(chǎn)物在大小上相區(qū)別。若PCR的目的是克隆一個(gè)基因或cDNA的特異序列，產(chǎn)物的大小是根據(jù)具體應(yīng)用預(yù)選的。在這里，計(jì)算機(jī)程序可以提供關(guān)于期望區(qū)域側(cè)翼選擇引物對(duì)的信息。在選擇用來擴(kuò)增來自不同物種DNA的引物時(shí)，應(yīng)避開mRNA的5’和3’末端非翻譯區(qū)序列，因?yàn)樗鼈兛赡軟]有任何的同源性。3．簡(jiǎn)并引物設(shè)計(jì)①設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物時(shí)，一定要檢查靶擴(kuò)增區(qū)域選定氨基酸遺傳密碼的簡(jiǎn)并度。很顯然，我們期望選擇簡(jiǎn)并度低的氨基酸，達(dá)到提高特異性的目的。②充分注意物種對(duì)于密碼子的偏好性。
1．一般性原則(1)長(zhǎng)度：一般引物互補(bǔ)區(qū)的長(zhǎng)度為16-25bp，引物互補(bǔ)區(qū)的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70，一般也不要低于50(2)G十c含量：好在45％一55％之間，但有時(shí)受模板限制，無法理想化。但在有幾種選擇時(shí)，可以把G十c含量接近50%作為參數(shù)之一(3)堿基分布的隨機(jī)性：應(yīng)避免連續(xù)出現(xiàn)4個(gè)以上的單一堿基。尤其是不應(yīng)在其3’端出現(xiàn)超過3個(gè)的連續(xù)G或C，否則會(huì)使引物在G十C富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。(4)引物自身：不能含有很長(zhǎng)的牢固的自身互補(bǔ)序列，尤其是引物3‘端回折形成的發(fā)夾不要一般超過3堿基，否則會(huì)影響引物與模板的結(jié)合(5)引物之間：兩個(gè)引物之間不應(yīng)有很長(zhǎng)的牢固的互補(bǔ)或同源堿基，尤應(yīng)避免3’端的互補(bǔ)重疊。2.具體原則①引物長(zhǎng)度；特異性一般通過引物長(zhǎng)度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設(shè)置在近于引物Tm值（引物/模板雙鏈體的解鏈溫度）幾度的范圍內(nèi)，18到24個(gè)堿基的寡核苷酸鏈?zhǔn)怯泻芎玫男蛄刑禺愋缘?。引物越長(zhǎng)，擴(kuò)增退火時(shí)被引發(fā)的模板越少。為優(yōu)化PCR反應(yīng)，使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物，可獲得好的效率和特異性。總的來說，好在特異性允許的范圍內(nèi)尋求安全性。每增加一個(gè)核苷酸，引物特異性提高4倍；這樣，大多數(shù)應(yīng)用的短引物長(zhǎng)度為18個(gè)核苷酸。 基于聚合酶制造的PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。
基本的PCR須具備:1.要被復(fù)制的DNA模板2.界定復(fù)制范圍兩端的引物（四種脫氧核苷酸）及水。利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈，進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。PCR的設(shè)想核酸研究已有100多年的歷史，二十世紀(jì)60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù)，Korana于1971年提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想：“經(jīng)過DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過程便可克隆tRNA基因”。1985年美國(guó)PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發(fā)明了具有劃時(shí)代意義的聚合酶鏈反應(yīng)。其原理類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。Mullis使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段，其缺點(diǎn)是：①Klenow酶不耐高溫，90℃會(huì)變性失活，每次循環(huán)都要重新加。②引物鏈延伸反應(yīng)在37℃下進(jìn)行，容易發(fā)生模板和引物之間的堿基錯(cuò)配，其PCR產(chǎn)物特異性較差，合成的DN段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術(shù)雖較傳統(tǒng)的基因擴(kuò)增具備許多突出的優(yōu)點(diǎn)，但由于Klenow酶不耐熱，在DNA模板進(jìn)行熱變性時(shí)，會(huì)導(dǎo)致此酶鈍化，每加入一次酶只能完成一個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)周期，給PCR技術(shù)操作程序添了不少困難。這使得PCR技術(shù)在一段時(shí)間內(nèi)沒能引起生物醫(yī)學(xué)界的足夠重視。 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)是近年來的新型檢測(cè)技術(shù),已成為分子醫(yī)學(xué)/生物學(xué)研究的工具,并在許多領(lǐng)域得到了應(yīng)用.國(guó)產(chǎn)基因擴(kuò)增PCR儀生產(chǎn)廠家
只要樣本有一個(gè)病原體存在，PCR就可以檢測(cè)到。國(guó)產(chǎn)基因擴(kuò)增PCR儀生產(chǎn)廠家
熒光定量PCR儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟的現(xiàn)今，難得不是實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實(shí)驗(yàn)室成員的意見、分析實(shí)驗(yàn)室目前乃至將來的需求、平衡實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算，更要詳細(xì)研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對(duì)各種不同性能的產(chǎn)品，您又該如何選擇呢？首先建議大家走出認(rèn)識(shí)熒光定量PCR的兩個(gè)誤區(qū)：誤區(qū)一：儀器通道越多越好隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用，多重?cái)U(kuò)增越來越熱鬧，熒光定量PCR儀也不能幸免。在使用有些廠家5通道的熒光定量?jī)x時(shí)，為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX（一種熒光染料）或Referencedye，這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測(cè)通道。這樣以來，真正能檢測(cè)多重PCR熒光信號(hào)的有效通道只有4個(gè)，而且使用校正染料可能會(huì)增加后期的使用成本?？紤]多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā)，多重PCR并非人人適用、人人可用，因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。誤區(qū)二：real-timePCR儀無需梯度功能對(duì)于使用染料法的定量PCR反應(yīng)，雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度（Tm值），但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同。國(guó)產(chǎn)基因擴(kuò)增PCR儀生產(chǎn)廠家
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