胎牛血清作為細胞生長不可缺少的重要營養(yǎng)來源一直備受科研人員重視,那么胎牛血清在參與細胞培養(yǎng)實驗都發(fā)揮著什么作用呢?胎牛血清,是胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、元素、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量很大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必需的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能:提供維持細胞指數(shù)生長的元素、基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。無合格質檢的胎牛血清存在支原體、病毒等污染,這對細胞培養(yǎng)的實驗結果會造成嚴重不良影響。高郵RPMI 1640培養(yǎng)基(無硝酸鈣)
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、元素、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質更高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分更少。無錫MEM胎牛血清,是胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物。
胎牛血清都有哪些重要的指標:一、內有害元素,內有害元素是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有成分。當細菌死亡自溶或粘附在其它細胞時,才表現(xiàn)其毒性。內有害元素直接參與細胞凋亡,血清中內有害元素含量越低,對細胞毒性越小,越利于細胞的生長和傳代;內有害元素含量過高,會直接導致細胞提前老化。國際上規(guī)定,胎牛血清的級別,應以內有害元素水平的高低來確定,其中,特級胎牛血清的內有害元素應。二、血紅蛋白含量,胎牛血清的顏色會根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細胞培養(yǎng)用血清的標準是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響。這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采集血液過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
使用胎牛血清的注意事項:注意解凍的方法,再高質量的胎牛血清也要在使用的時候堅持謹慎的原則,因此在解凍血清的時候,要細心地考慮到其解凍時體積一般會增大的特點,事先為血清預留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發(fā)生污染或者容器凍裂的情況。另外更好采用分步解凍的方式解凍血清,即先利用冰箱或冷庫將其溶解滿幾天,之后在室溫下全溶后再進行分裝。胎牛血清的滅活,一般是用水浴加熱的方式來加熱已經(jīng)完全解凍的血清,那么需要注意的是,加熱的過程中一定要規(guī)則地將血清搖晃均勻。而之所以這么做,是為了能夠讓血清中的補體成分去活化。不過胎牛血清的滅活并不是強制的要求,客戶可以自行選擇是否進行滅火處理。胎牛血清是一個比較先進的產(chǎn)品,也是一個比較先進的研發(fā)成果。
胎牛血清(FoetalBovineSerum,簡稱FBS):是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育完全這些因子自動消失。因此8個月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來使用。有下列情況者,對血清內有害元素應格外留意篩選:1.養(yǎng)干細胞時,干細胞對內有害元素非常敏感,如果血清中內有害元素≥3EU/ml時,干細胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。2.養(yǎng)免疫細胞時,過高的內有害元素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。3.基因敲除相關的細胞實驗,培養(yǎng)的細胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導細胞衰老或凋亡的試劑,都會讓后續(xù)的實驗結果“失之毫厘,謬以千里”。在準備血清和其他試劑時,選擇極低的內有害元素(更好≤1EU/ml),對實驗至關重要。胎牛血清的完全培養(yǎng)基仍然是目前主流的細胞培養(yǎng)體系。張家港RPMI 1640 Medium
胎牛血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、元素、無機物等。高郵RPMI 1640培養(yǎng)基(無硝酸鈣)
胎牛血清保存方法:1、需要長期保存的澳洲牛血清,例如澳洲南美胎牛血清,必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)澳洲牛血清有懸浮物,例如澳洲北美胎牛血清中發(fā)現(xiàn)有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接過濾血清。高郵RPMI 1640培養(yǎng)基(無硝酸鈣)
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