更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,能夠催化同一熒光素底物,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。免疫熒光法免疫熒光法的基本...
或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析。2.***成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射。4)注射入體內10-15min(待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期)后進行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,從而...
可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,產生480nm的藍光。與螢火蟲螢光素酶類似,海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒(#AAT-12535)提供了一種快速,靈敏的方法,可以使用專有的發(fā)...
luciferin)的分子結構如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應,生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結構如右圖所示,并產生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進口,產品價格昂貴。而且由于該產品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國產化的方式生產,一方面可以降低成本,一方面可以增強使用效果。作者:科遠迪鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權歸作者所有。商業(yè)轉載請聯(lián)系作者獲得授權,非商業(yè)轉載請注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基...
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告...
后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質性的差別。產品性質運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵...
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告...
tetrametrylrhodarnineisothiocyante,TRITC)是一種紫紅色粉末,較穩(wěn)定,是羅達明(rhodamine)的衍生物。更大吸收光譜550urn,更大發(fā)射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發(fā)射的黃綠色熒光對比鮮明,常用于雙標記染色。按照抗原抗體反應的結合步聚,免疫熒光法可分為以下三種。1.直接法用熒光素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合,以檢查出相應的抗原成分。2.間接法先用特異性抗體與相應的抗原結合,洗去未結合的抗體,再用熒光素標記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結合,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的復合物。在此復合物上帶有比直接法...
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告...
故根據熒光反應的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年,科學家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結構;1985年,科學家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達,從而得到了具有活性的熒光素酶;1986年,科學家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,熒光素酶的研究和應用不斷發(fā)展。目前,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術已經廣泛應用到醫(yī)學、生命科學、環(huán)境科學、微生物學等許多領域。以醫(yī)學領域為例,專家們將熒光素酶基因嵌入到*細胞中,再注入熒光素,使*細胞發(fā)光,通過探測熒光,就能...
熒光素也就是FDAFDA可透過細胞膜并作為熒光素積蓄在活細胞內。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,因此熒光素從細胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和530nm。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內的熒光素酶。在相應化學反應中,熒光的產生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(與肌肉收縮的情況相...
就可以用高敏感度的CCD相機對動物體內進行***觀察而不會傷害到動物本身。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如螢光探測器或改進后的光學顯微鏡探測到。這就使得對包括***在內的多種生命活動進程進行觀察成為可能。例如,螢光素酶已經被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術,借由dNTP接上DNA鏈時水解放出的焦磷酸,透過另外一個硫酸鹽腺甘酸轉移酶反應,螢光素酶能將產物ATP與螢光素轉化為冷光,機器借此探測光線并定序。螢光素酶也可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來...
包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質性的差別。產品性質運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾...
注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號115144-35-9為準。2)注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3)如果要進行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水。4)為避免反復凍融,本產品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,如有條件,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。5)對于檢測靈敏度要求特別...
2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結合物吖啶酯-T3結合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結合物吖啶磺酰胺鹽-T3結合物生物素-T4結合物化學發(fā)光分析試劑及標記物生物素-T3結合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-N...
luciferin)的分子結構如右圖所示:,在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應,生成氧化熒光素(oxyluciferin),分子結構如右圖所示,并產生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進口,產品價格昂貴。而且由于該產品容易降解、受潮影響使用效果。所以,需要國產化的方式生產,一方面可以降低成本,一方面可以增強使用效果。作者:科遠迪鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權歸作者所有。商業(yè)轉載請聯(lián)系作者獲得授權,非商業(yè)轉載請注明出處。D-luciferin,potassiumsalt熒光素產品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,一般是將Fireflyluciferase基...
luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusoleariu')或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧...
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告...
LAR)Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內部歸一化,在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關鍵進展。此外,pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進的例子后來被進一步應用到pG...
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告...
從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響,根據生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級純()應用:1)活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析;2)***用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1)配制成100mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml)。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2...
包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質性的差別。產品性質運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾...
螢火蟲熒光素酶(Luciferase)是一種常用的信號分子,可以用來標記腫瘤細胞.一.細胞方法將帶有熒光素luc轉酶報告基因的真核表達重組質粒pRc/CMV2-7,利用G418篩選,獲得穩(wěn)染人乳腺哎細胞株MCF-7-luc,并在穩(wěn)定表達熒光素酶基因的細胞克隆MCF-7體外評價其發(fā)光能力。通過建立裸鼠移植瘤模型,利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉移情況,為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定:37℃細胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml設置6個濃度梯度。在細...
GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-lucif...
經HE染色后觀察細胞的病理形態(tài)學?;铑}動物成像技術是近期發(fā)展起來的一種新型穩(wěn)定可靠,是檢測動物體內分子及細胞事件的影像檢測技術,強有力手段。利用生物發(fā)光成像(BLI)可以對活題病灶的大小進行無損傷直觀準確檢測。我們有自己的獨自有機合成實驗室,可以生產合成各種化學發(fā)光試劑,我們可以提供化學發(fā)光試劑、化學發(fā)光底物、發(fā)光標記物、發(fā)光增強劑、染料探針類、微生物和酶的顯色底物以及體外診斷試劑。相關列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇丙的酮...
并實現(xiàn)了在非常高通量的應用中使用報告基因檢測。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細胞健康的重要指標,這使得CellTiter-Glo?能有效測定細胞活力,尤其是在高通量應用中。該檢測原理還促進了其它ATP檢測平臺的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不...
具體實驗流程:注:該操作流程通常用來檢測轉染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細胞中熒光素酶表達的活性,不適用于對細菌熒光素酶進行檢測。1.實驗***天,消化并接種細胞(根據具體實驗選擇合適的細胞)于35mm細胞培養(yǎng)皿,置于5%CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)過夜。2.等細胞密度達到70%時用Luciferase報告基因質粒、LacZ的表達質粒及其它質粒(根據具體實驗確定)共轉染細胞(根據具體實驗選擇轉染方法,如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可)。3.轉染24-36h后,吸取培養(yǎng)液,用預冷的PBS(無鈣和鎂離子)洗滌細胞。注:熒光酶的酶促反應會被痕量的鈣所抑制...
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告...
2)按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應量的15mg/mL熒光素溶液;3)腹腔注射10-15min后進行成像分析。(對每只動物模型做熒光素動力學研究以確定峰值信號獲取時間)Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式:C11H8N2O3S2分子量:g/mol外觀:白色至淺黃色粉末溶解:,形成近乎無色至淺黃色的清夜保存:-15°C避光應用:1)活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析;2)***用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種...
而是對于所有能夠產生螢光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的螢光素酶,能夠催化同一螢光素底物,而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的螢光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。...