DNA（主要是CpG的）甲基化是其遺傳機制和表型效應**為明確的表觀遺傳性機制。DNA甲基化譜式的變化不僅指導在正常發(fā)育過程中細胞譜系特化所依據(jù)的基因組轉(zhuǎn)錄譜式的改變，且在疾病發(fā)生和發(fā)展的基因表達異化中起著決定性的作用。為了高效準確的分析基因組中所有的甲基化位點，可采用全基因組甲基化（Whole Genome Bisulfite Sequence，WGBS）。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一，包括基于序列、熔化溫度和交互的分析，WGBS是通過重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶（C）脫氨基轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ║），而甲基化的胞嘧啶保持不變，再經(jīng)PCR將U轉(zhuǎn)變?yōu)門，結合NGS便可高效準確地分析基因組中所有甲基化位點。表觀遺傳學研究已經(jīng)證實了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對于染色體構象、基因表達調(diào)控機制有著重要影響。上海亞硫酸鹽甲基化重測序公司
在生物系統(tǒng)內(nèi)，甲基化是經(jīng)酶催化的，這種甲基化涉及重金屬修飾、基因表達的調(diào)控、蛋白質(zhì)功能的調(diào)節(jié)以及核糖核酸(RNA)加工。重金屬修飾可以在生物系統(tǒng)外發(fā)生。組織樣本的化學甲基化也是組織染色的方法之一。表觀遺傳學的甲基化包括DNA甲基化或蛋白質(zhì)甲基化。1）DNA甲基化。脊椎動物的DNA甲基化一般發(fā)生在CpG位點（胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤位點，即DNA序列中胞嘧啶后緊連鳥嘌呤的位點）。經(jīng)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為5-甲基胞嘧啶。人類基因中約80%-90%的CpG位點已被甲基化，但是在某些特定區(qū)域，如富含胞嘧啶和鳥嘌呤的CpG島則未被甲基化。這與包含所有普遍表達基因在內(nèi)的56%的哺乳動物基因中的啟動子有關。1%-2%的人類基因組是CpG群，并且CpG甲基化與轉(zhuǎn)錄活性成反比。目標區(qū)域甲基化重測序準確度高上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭。
目標區(qū)域甲基化重測序（Hi-MethylSeq），又叫重亞硫酸鹽擴增子測序（Bisulfite Amplicon Sequencing， BSAS）。在前期全基因組甲基化測序、全基因組甲基化芯片等工作基礎上，或者依據(jù)文獻報道目的基因甲基化與性狀/疾病關聯(lián)，選擇感興趣的目的區(qū)間或候選基因，利用Hi-MethylSeq技術對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。Hi-MethylSeq技術通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進行高通量測序，利用生物信息學方法，精確定量計算目標區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài)，在完成目標區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。
DNA去甲基化分為兩類：主動去甲基化（Active DNA Demethylation）和被動去甲基化（Passive DNA Demethylation）。基因組甲基化模式的形成主要依賴于主動去甲基化，主要涉及一類具有DNA去甲基化功能的蛋白，可能存在的五種機制a. DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶參與的堿基切除修復（base excision repair；BER）：5-mC 由DNA 轉(zhuǎn)葡糖基酶直接去除。此途徑主要存在于植物體內(nèi)，動物體內(nèi)也可能存在。b.脫氨酶參與的堿基切除修復：5-mC 脫氨變成胸腺嘧啶T，形成G/T 錯配，進入BER 途徑。這一途徑主要存在于動物體中，植物體中也可能存在。c.核苷酸外切修復機制（nucleotide excision repair；NER）：直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化：發(fā)生氧化反應打開碳-碳鍵，直接去除甲基基團。e.水解去甲基化：水解胞嘧啶的甲基基團，使其以甲醇的形式被釋放。DNA被動去甲基化是指當DNMTs活性被抑制或濃度過低時，無法維持原有的甲基化狀態(tài)，使DNA甲基化程度降低的過程，這類去甲基化通常發(fā)生在細胞復制的兩個周期之間，涉及到某些可與DNMTs結合的因子，其結合后形成的復合物可以阻止DNMTs與DNA的結合。如果在細胞分裂過程中不被糾正,就會誘發(fā)遺傳病或tumour,而且,生物體甲基化的方式是穩(wěn)定的, 可遺傳的。
WGBS能為基因組DNA甲基化時空特異性修飾的研究提供重要技術支持，能廣泛應用在個體發(fā)育、衰老和疾病等生命過程的機制研究中，也是各物種甲基化圖譜研究的優(yōu)先方法。常規(guī)全基因組甲基化測序技術通過T4-DNA連接酶，在超聲波打斷基因組DNA段的兩端連接接頭序列，連接產(chǎn)物通過重亞硫酸鹽處理將未甲基化修飾的胞嘧啶C轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏，進而通過接頭序列介導的 PCR 技術將尿嘧啶U轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵汆奏。上海翼和是上海市遺傳學會理事單位，上海市****，至今已有十六年的歷史。亞硫酸鹽處理這種方法可靠，且精確度高，能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態(tài)。江蘇目標位點甲基化重測序準確度高
目標區(qū)域甲基化重測序（Hi-Methylseq）結合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術。上海亞硫酸鹽甲基化重測序公司
DNA甲基化是DNA化學修飾的一種形式，能夠在不改變DNA序列的前提下，改變遺傳表現(xiàn)。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個核苷酸中的胞嘧啶被選擇性地添加甲基基團的化學修飾現(xiàn)象，極常見的是在胞嘧啶的5號碳位置，在酶和底物的作用下，引入一個甲基基團，變成了5甲基胞嘧啶（5mC），從而改變了它的活性。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生，起著至關重要的作用。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用PCR擴增目的片段，并結合二代測序平臺（illumina等主流測序平臺）并對PCR產(chǎn)物進行測序，本方案目標區(qū)域甲基化測序服務Hi-MethylSeq，在完成目標區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。上海亞硫酸鹽甲基化重測序公司
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