成都目標(biāo)位點甲基化重測序報告

來源: 發(fā)布時間:2022-01-20

DNA甲基化作為一種重要的表觀修飾,在調(diào)控基因的時空特異性表達中扮演著關(guān)鍵的角色,參與了X染色體失活、基因組印記和重復(fù)序列抑制等諸多生命過程。哺乳動物細胞的DNA甲基化主要發(fā)生在CpG二核苷酸對的C(胞嘧啶)上,并在有絲分裂過程中得以相對穩(wěn)定的維持,這對細胞保持譜系特性有著重要的意義。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的Hi-MethylSeq技術(shù),可對對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會理事單位。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一。成都目標(biāo)位點甲基化重測序報告

物種的DNA甲基化率通常與物種基因組大小成正比。從細菌的數(shù)千個基因進化到高等動物的數(shù)萬個基因,基因數(shù)增長的一個數(shù)量級。要管好這么多的基因,在漫長的一生中有規(guī)律地關(guān)閉或打開基因表達,DNA甲基化這個開關(guān)對高等動植物必不可少。轉(zhuǎn)座子是一類在基因組上可以自主復(fù)制(或剪切)和移動的**功能元件。如果它們隨意移動,對基因組的穩(wěn)定性具有破壞作用。DNA甲基化對轉(zhuǎn)座子的移動具有抑制作用。通常,物種的基因組越大,其基因組中轉(zhuǎn)座子的比例越高,那么限制轉(zhuǎn)座子移動的門神——DNA甲基化的比例就越高。南京CPG島甲基化重測序公司DNA甲基化是在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)的過程。

DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyl-transferase, DNMT)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作為甲基供體,將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應(yīng),在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是**主要的甲基化位點,它在基因組中呈不均勻分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域,在哺乳動物中mC約占C總量的2-7%。甲基化檢測服務(wù)-亞硫酸氫鈉處理后測序法 (bisulfite genomic sequencing PCR, BSP)是利用未甲基化的胞嘧啶可以被亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏さ脑?,用兩一特異性引物擴增后測序。測序法克服了只能針對單個位點檢測,并且這些位點必須是限制性內(nèi)切酶識別位點的缺點,可以對任何基因序列的甲基化狀態(tài)進行檢測。

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾,它被認為在許多生物學(xué)過程和疾病中有著重要的作用。隨著測序技術(shù)的快速發(fā)展,二代測序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結(jié)合產(chǎn)生了可以在全基因組單堿基水平上測量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測序(whole-genome bisulfite sequencing,WGBS)技術(shù)。WGBS的流程與全基因組DNA測序主要區(qū)別于DNA文庫的構(gòu)建。以MethlyC-seq為例,將DNA 段化后收集特定長度的片段并修復(fù)DNA末端,再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭,接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶(C)轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U), 終進行低循環(huán)數(shù)的PCR擴增后完成建庫,建庫完后上機測序,得到原始數(shù)據(jù)(fastq文件)后,完成一定的質(zhì)量控制后就可以進行mapping分析。DNA甲基化分析是經(jīng)過亞硫酸氫鹽處理后,用PCR擴增目的片段,并對PCR產(chǎn)物進行測序.

DNA甲基化主要發(fā)生在啟動子區(qū)CPG島,在調(diào)節(jié)基因表達和其他功能方面起著關(guān)鍵作用.異常的DNA甲基化可參與調(diào)控疾病相關(guān)的分子信號通路,從而影響其正常功能。DNA甲基化在生物個體的生長發(fā)育與繁殖過程中,維持遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。細胞采用多種機制來保證DNA復(fù)制的忠實性,如DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)與半保留復(fù)制模式為遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定提供了物質(zhì)基礎(chǔ);DNA聚合酶Ⅲ除了具有DNA聚合酶活性外還具有5’到3’的核酸外切酶活性,可及時去除錯配摻人的堿基;DNA復(fù)制后存在多種修復(fù)機制進一步保證了遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性。DNA甲基化在DNA復(fù)制起始、錯配修復(fù)、細菌中寄主控制的修飾與限制以及轉(zhuǎn)座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩(wěn)定性發(fā)揮著重要的作用。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽處理,用PCR擴增目的片段,并結(jié)合二代測序平臺并對PCR產(chǎn)物進行測序。多重PCR技術(shù)甲基化重測序技術(shù)服務(wù)

DNA甲基化是研究**為普遍的表觀遺傳修飾,它被認為在許多生物學(xué)過程和疾病中有著重要的作用。成都目標(biāo)位點甲基化重測序報告

DNA去甲基化分為兩類:主動去甲基化(Active DNA Demethylation)和被動去甲基化(Passive DNA Demethylation)。基因組甲基化模式的形成主要依賴于主動去甲基化,主要涉及一類具有DNA去甲基化功能的蛋白,可能存在的五種機制a. DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶參與的堿基切除修復(fù)(base excision repair;BER):5-mC 由DNA 轉(zhuǎn)葡糖基酶直接去除。此途徑主要存在于植物體內(nèi),動物體內(nèi)也可能存在。b.脫氨酶參與的堿基切除修復(fù):5-mC 脫氨變成胸腺嘧啶T,形成G/T 錯配,進入BER 途徑。這一途徑主要存在于動物體中,植物體中也可能存在。c.核苷酸外切修復(fù)機制(nucleotide excision repair;NER):直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化:發(fā)生氧化反應(yīng)打開碳-碳鍵,直接去除甲基基團。e.水解去甲基化:水解胞嘧啶的甲基基團,使其以甲醇的形式被釋放。DNA被動去甲基化是指當(dāng)DNMTs活性被抑制或濃度過低時,無法維持原有的甲基化狀態(tài),使DNA甲基化程度降低的過程,這類去甲基化通常發(fā)生在細胞復(fù)制的兩個周期之間,涉及到某些可與DNMTs結(jié)合的因子,其結(jié)合后形成的復(fù)合物可以阻止DNMTs與DNA的結(jié)合。成都目標(biāo)位點甲基化重測序報告

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