北京目標(biāo)甲基化重測(cè)序哪里好

DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, DNMT）催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作為甲基供體，將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應(yīng)，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是**主要的甲基化位點(diǎn)，它在基因組中呈不均勻分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域，在哺乳動(dòng)物中mC約占C總量的2－7％。甲基化檢測(cè)服務(wù)-亞硫酸氫鈉處理后測(cè)序法 (bisulfite genomic sequencing PCR, BSP)是利用未甲基化的胞嘧啶可以被亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏さ脑?，用兩一特異性引物擴(kuò)增后測(cè)序。測(cè)序法克服了只能針對(duì)單個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)，并且這些位點(diǎn)必須是限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的缺點(diǎn)，可以對(duì)任何基因序列的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。Hi-MethylSeq在研究DNA甲基化時(shí)，每一個(gè)read都相當(dāng)于克隆測(cè)序時(shí)的一個(gè)單克隆。北京目標(biāo)甲基化重測(cè)序哪里好

DNA甲基化（DNA methylation）為DNA化學(xué)修飾的一種形式，能夠在不改變DNA序列的前提下，改變遺傳表現(xiàn)。所謂DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下，在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5號(hào)碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。大量研究表明，DNA甲基化能引起染結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達(dá)。WGBS是基于重亞硫酸鹽的甲基化分析方法，首先通過Bisulfite對(duì)樣本DNA進(jìn)行處理，將未甲基化的C堿基轉(zhuǎn)化為U堿基，而甲基化的C堿基則不會(huì)改變，進(jìn)行PCA擴(kuò)增后U堿基會(huì)變成T，與原本甲基化的C堿基區(qū)分開，再結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)，可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。北京目標(biāo)甲基化重測(cè)序哪里好Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù)，可實(shí)現(xiàn) 多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析。

DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記，在調(diào)控基因表達(dá)、細(xì)胞的分化與發(fā)育等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。使用基于重亞硫酸氫鹽測(cè)序的方法進(jìn)行DNA甲基化評(píng)估：首先用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA可將未甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（黃色字母），而甲基化胞嘧啶保留為胞嘧啶（白色字母）；然后進(jìn)行兩輪PCR：first輪PCR分別放大每個(gè)樣本的每個(gè)區(qū)域，并添加8個(gè)隨機(jī)核苷酸（N8）用于重復(fù)數(shù)據(jù)消除和適配體序列；在匯集每個(gè)生物樣本的擴(kuò)增子后，第二輪PCR完成帶有樣本barcode的序列庫(kù)，用于多樣本NGS測(cè)序。

亞硫酸氫鈉修飾后測(cè)序法是一種對(duì)DNA進(jìn)行亞硫酸氫鈉處理、聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增與DNA測(cè)序相結(jié)合的方法，能夠提供測(cè)定區(qū)域的序列信息，準(zhǔn)確定位甲基化胞嘧啶位點(diǎn)；重亞硫酸鹽修飾后，甲基化胞嘧啶保持不變，但非甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ琍CR擴(kuò)增后為胸腺嘧啶，其將甲基化狀態(tài)的差異轉(zhuǎn)化成堿基的差異，從而對(duì)胞嘧啶的甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析；但在亞硫酸鈉處理的酸性環(huán)境下，單鏈特異性PCR模板穩(wěn)定性下降，容易降解；并且模板鏈CG二核苷酸水平高易形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)，常出現(xiàn)非特異性條帶，結(jié)合“巢式PCR法”能明顯提高擴(kuò)增的特異度。5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC)是一種常見的DNA修飾類型，能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。

DNA甲基化（DNA methylation）為DNA化學(xué)修飾的一種形式，能在不改變DNA序列的前提下，改變遺傳表觀。 DNA甲基化在維持細(xì)胞正常功能、傳遞基因組印記，胚胎發(fā)育、tumour發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用，目前已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的研究熱點(diǎn)。DNA甲基化測(cè)序可在全基因組水平上比較大限度的、完整的獲取甲基化狀態(tài)信息和與基因表達(dá)調(diào)控的多重關(guān)系，可高效精確完成全基因組甲基化測(cè)序及*分辨DNA甲基化譜式繪制，并可對(duì)發(fā)現(xiàn)的靶點(diǎn)區(qū)進(jìn)行甲基化特異性PCR驗(yàn)證。DNA甲基化可引起基因組中相應(yīng)區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,使DNA失去核酶限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn),。全基因組甲基化重測(cè)序怎么解決

在基因組的某些區(qū)域中，通常位于基因的啟動(dòng)子區(qū)，CpG 序列密度很高，可以達(dá)均值的5 倍以上。北京目標(biāo)甲基化重測(cè)序哪里好

DNA甲基化作為一種重要的表觀修飾，在調(diào)控基因的時(shí)空特異性表達(dá)中扮演著關(guān)鍵的角色，參與了X染色體失活、基因組印記和重復(fù)序列抑制等諸多生命過程。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA甲基化主要發(fā)生在CpG二核苷酸對(duì)的C（胞嘧啶）上，并在有絲分裂過程中得以相對(duì)穩(wěn)定的維持，這對(duì)細(xì)胞保持譜系特性有著重要的意義。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的Hi-MethylSeq技術(shù)，可對(duì)對(duì)大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測(cè)。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位。北京目標(biāo)甲基化重測(cè)序哪里好

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