DNA甲基化是指針對DNA序列上的CpG島，由甲基化轉(zhuǎn)移酶將S腺苷甲硫氨酸的甲基轉(zhuǎn)移給胞嘧啶。其中，5’甲基胞嘧啶(5mC) 的甲基化是一個非常重要的表觀遺傳學(xué)修飾事件，該事件能夠調(diào)控基因活性，并影響著如細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和染色質(zhì)重塑等生物學(xué)過程。重亞硫酸鹽測序可以從單個堿基水平分析基因組中甲基化的胞嘧啶。首先，利用重?zé)熈蛩猁}對基因組DNA進(jìn)行處理，將未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基變成尿嘧啶。而發(fā)生了甲基化的胞嘧啶未發(fā)生脫氨基，因而，可以基于此將經(jīng)重亞硫酸鹽處理的和未處理的測序樣本進(jìn)行比較來發(fā)現(xiàn)甲基化的位點。重亞硫酸鹽擴增子測序法基于非甲基化胞嘧啶（C）向尿嘧啶（U）的化學(xué)轉(zhuǎn)化，即用重亞硫酸鹽處理基因組DNA。江蘇CPG島甲基化重測序報告
在表觀遺傳中，DNA甲基化修飾具有非常重要的地位。其中胞嘧啶雜環(huán)5號位的甲基化修飾，又稱作5-甲基胞嘧啶（5mC），是**常見的甲基化修飾方式，也是迄今為止研究**為普遍的DNA甲基化修飾方式。一般認(rèn)為當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在基因啟動子區(qū)，就會抑制基因轉(zhuǎn)錄，從而起到負(fù)調(diào)控的作用。DNA甲基化的形成機制，包括從頭合成（de novo），甲基化的維持（Maintenance）和去甲基化（Demethylation），這些過程分別由不同的基因和通路調(diào)控。這些基因和通路在動植物中即保守，又有所區(qū)別。廣州亞硫酸鹽甲基化重測序準(zhǔn)確度高表觀遺傳屬于一種可以對環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機制。
DNA 甲基化是早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA 甲基化能關(guān)閉某些基因的活性，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鳥嘌呤。原核生物中CCA/TGG和GATC常被甲基化，而真核生物中甲基化發(fā)生于胞嘧啶。DNA 的甲基化是在DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?'甲基胞嘧啶。這種DNA 修飾方式并沒有改變基因序列，但是它調(diào)控了基因的表達(dá)。
亞硫酸氫鈉修飾后測序法是一種對DNA進(jìn)行亞硫酸氫鈉處理、聚合酶鏈反應(yīng)擴增與DNA測序相結(jié)合的方法，能夠提供測定區(qū)域的序列信息，準(zhǔn)確定位甲基化胞嘧啶位點；重亞硫酸鹽修飾后，甲基化胞嘧啶保持不變，但非甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ琍CR擴增后為胸腺嘧啶，其將甲基化狀態(tài)的差異轉(zhuǎn)化成堿基的差異，從而對胞嘧啶的甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析；但在亞硫酸鈉處理的酸性環(huán)境下，單鏈特異性PCR模板穩(wěn)定性下降，容易降解；并且模板鏈CG二核苷酸水平高易形成復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)，常出現(xiàn)非特異性條帶，結(jié)合“巢式PCR法”能明顯提高擴增的特異度。表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機制有著重要影響。
DNA（主要是CpG的）甲基化是其遺傳機制和表型效應(yīng)**為明確的表觀遺傳性機制。DNA甲基化譜式的變化不僅指導(dǎo)在正常發(fā)育過程中細(xì)胞譜系特化所依據(jù)的基因組轉(zhuǎn)錄譜式的改變，且在疾病發(fā)生和發(fā)展的基因表達(dá)異化中起著決定性的作用。為了高效準(zhǔn)確的分析基因組中所有的甲基化位點，可采用全基因組甲基化（Whole Genome Bisulfite Sequence，WGBS）。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一，包括基于序列、熔化溫度和交互的分析，WGBS是通過重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶（C）脫氨基轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ║），而甲基化的胞嘧啶保持不變，再經(jīng)PCR將U轉(zhuǎn)變?yōu)門，結(jié)合NGS便可高效準(zhǔn)確地分析基因組中所有甲基化位點。DNA 甲基化能關(guān)閉某些基因的活性，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。北京目標(biāo)區(qū)段甲基化重測序怎么解決
基因甲基化幾乎發(fā)生在CpG島（70%啟動子）會損害轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，發(fā)生在基因區(qū)間能抑制有害元件的表達(dá)。江蘇CPG島甲基化重測序報告
5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC) 是一種常見的DNA修飾類型，能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。全基因組重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的WGBS法，能夠?qū)崿F(xiàn)單堿基分辨率的甲基化位點準(zhǔn)確、高效定位。通過***分析不同處理方式下的全基因組甲基化水平，快速準(zhǔn)確鑒定出差異甲基化區(qū)域，有助于我們更加***深入地了解動、植物的甲基化模式和表觀調(diào)控機制，在動物行為、植物脅迫、植物性狀、胚胎發(fā)育、cancer疾病、生物標(biāo)記物等方面具有普遍的應(yīng)用。江蘇CPG島甲基化重測序報告
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