北京小鼠鑒定ATCC

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-09-15

翼和送樣要求有以下幾點(diǎn): 1.細(xì)胞上清:在無抗生su及其它抑菌或滅菌物質(zhì)條件下培養(yǎng)3天,取1.0ml 細(xì)胞培養(yǎng)上清液移至2ml離心管中,請加冰袋運(yùn)輸。2.細(xì)胞沉淀:在無抗生su及其它抑菌或滅菌物質(zhì)條件下培養(yǎng)3天,取1.0ml 細(xì)胞培養(yǎng)上清液移至2ml 離心管中。將上清液移入無菌離心管以15,000-20,000g 速度離心10 分鐘,移除上清液,保留離心沉淀物(若貼壁細(xì)胞,使用細(xì)胞刮刮取細(xì)胞,吸取轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管,12000rpm離心沉淀細(xì)胞),請加冰袋運(yùn)輸。什么是細(xì)胞系STR鑒定?北京小鼠鑒定ATCC

上海翼和公司利用熒光PCR擴(kuò)增小鼠基因組中9個STR基因位點(diǎn),PCR產(chǎn)物在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測進(jìn)行基因分型。根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫(EXPASY)比對,從而鑒定樣品所屬的小鼠細(xì)胞系。2017年4月,翼和客戶山東泰山醫(yī)學(xué)院免疫所發(fā)表了EBioMedicine上的一篇論文,該文中編輯要求對突變小鼠的遺傳背景進(jìn)行鑒定,翼和公司應(yīng)用基于多重PCR與二代測序的近交系小鼠檢測方案2.0版本方案,成功的對基因編輯小鼠進(jìn)行了測試,并對小鼠遺傳背景進(jìn)行了STR鑒定,雜志編輯成功接受。北京STR鑒定位點(diǎn)上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會理事單位、翼和專家是ATCC國際細(xì)胞系認(rèn)證委員會成員。

小師弟:如何根據(jù)細(xì)胞STR鑒定結(jié)果判斷細(xì)胞系是否發(fā)生了交叉污染?如果存在細(xì)胞系之間發(fā)生交叉污染,而且鑒定用的細(xì)胞可能有兩種以上的細(xì)胞系時(shí),那么在進(jìn)行STR位點(diǎn)檢測的時(shí)候,多個位點(diǎn)會出現(xiàn)兩個以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號強(qiáng)度,理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此,存在交叉污染的混合細(xì)胞系中,其中一個位點(diǎn)中某些峰會明顯高于其他的峰,其中大峰是屬于混合細(xì)胞系中那個主要細(xì)胞系,而小峰則屬于那個次要細(xì)胞系。

什么細(xì)胞極為容易污染別的細(xì)胞?翼和為大家介紹,Hela細(xì)胞。因?yàn)樗L得快、長得好嘛。當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞突然長得很好,而以后都用它傳代做實(shí)驗(yàn)的話,十之八九是搞錯了。 有哪些細(xì)胞曾被Hela污染?lnt-407、HEp-2、WISH等一百余種。如何進(jìn)行細(xì)胞系鑒定?細(xì)胞系鑒定目前主要基于國際身份認(rèn)證委員會的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn),可以通過多重?zé)晒釶CR技術(shù),對人源8個STR位點(diǎn)以及1個性別決定位點(diǎn)進(jìn)行檢測。下表為這些位點(diǎn)的具體的遺傳信息。收到細(xì)胞系鑒定結(jié)果以及STR信息,可以與參考數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。

短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat,STR),又稱為微衛(wèi)星標(biāo)記(microsalite)。它普遍并均勻地存在于真核生物基因組中,一般由一個長2~6bp的中心序列經(jīng)多次串聯(lián)重復(fù)排列而成,重復(fù)次數(shù)大多在10~60次之間。個體間中心序列的重復(fù)次數(shù)呈高度變異性,構(gòu)成了STR的遺傳多態(tài)性。由于其序列簡短,通過PCR很容易從基因組DNA中特異性地?cái)U(kuò)增出來,極大簡化了微衛(wèi)星多態(tài)性分析的操作。研究者只需在目標(biāo)基因座設(shè)計(jì)一對或多對引物,通過PCR反應(yīng)從模板DNA中將該基因擴(kuò)增出來,然后使用測序儀進(jìn)行電泳分離分析即可。它具有分布普遍,易于檢測,信息量大,有高度多態(tài)性并遵循孟德爾共顯性遺傳等優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是繼限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)之后的第二代遺傳標(biāo)記,已普遍應(yīng)用于遺傳圖譜繪制、基因定位、法醫(yī)鑒定、遺傳病診斷等諸多領(lǐng)域。如何提供細(xì)胞系鑒定樣本?北京小鼠鑒定報(bào)告

翼和資質(zhì):上海市遺傳學(xué)會理事單位、國際細(xì)胞系認(rèn)證委員會成員。北京小鼠鑒定ATCC

什么時(shí)候需細(xì)胞系鑒定?(1)當(dāng)建立或獲得一個新的細(xì)胞系時(shí)(2)一個涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí)(3)在細(xì)胞凍存之前,或細(xì)胞已連續(xù)培養(yǎng)2~3個月時(shí)(4)發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前(5)細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時(shí)(6)當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用超過一種細(xì)胞系時(shí),所有細(xì)胞系比較好先鑒定以排除交叉污染的可能。如何提供鑒定樣本?每種細(xì)胞需單獨(dú)收集在1.5ml離心管中,細(xì)胞數(shù)目不少于 106個。細(xì)胞需要離心沉淀,并且以PBS清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基,沉淀沉淀進(jìn)行冰凍保存與寄送。北京小鼠鑒定ATCC

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