WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變?yōu)锳，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化。特點是精確度高、重復(fù)性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內(nèi)的每一個C堿基的甲基化狀態(tài)；但需要的數(shù)據(jù)量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會理事單位，上海市****，至今已有16年的歷史。DNA甲基化是指針對DNA序列上的CpG島，由甲基化轉(zhuǎn)移酶將S腺苷甲硫氨酸的甲基轉(zhuǎn)移給胞嘧啶。目標(biāo)甲基化重測序準(zhǔn)確度高
DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要形式，甲基化模式的異常促進細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，參與tumour演進。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型，一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化，基因組不穩(wěn)定性增加；另一方面啟動子區(qū)的高甲基化，引起抑cancer基因及錯配修復(fù)基因表達沉默，導(dǎo)致tumour的發(fā)生。研究表明，基因組的低甲基化隨著細(xì)胞惡性度的增加而愈加明顯，是病情診斷的重要指標(biāo)；此外，CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細(xì)胞惡變之前，能在早期預(yù)測tumour的發(fā)生，其也能有效地預(yù)測tumour的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此，檢測tumour發(fā)生中相關(guān)基因的甲基化模式具有重要意義，現(xiàn)就近年來中外文獻報道的甲基化檢測方法進行簡要的分析總結(jié)。南京目標(biāo)區(qū)域甲基化重測序哪里做重亞硫酸鹽測序可以從單個堿基水平分析基因組中甲基化的胞嘧啶。
DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, DNMT）催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作為甲基供體，將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應(yīng)，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是**主要的甲基化位點，它在基因組中呈不均勻分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域，在哺乳動物中mC約占C總量的2－7％。甲基化檢測服務(wù)-亞硫酸氫鈉處理后測序法 (bisulfite genomic sequencing PCR, BSP)是利用未甲基化的胞嘧啶可以被亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏さ脑?，用兩一特異性引物擴增后測序。測序法克服了只能針對單個位點檢測，并且這些位點必須是限制性內(nèi)切酶識別位點的缺點，可以對任何基因序列的甲基化狀態(tài)進行檢測。
DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因+表達。在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，這常見于基因的5'-CG-3'序列。大多數(shù)脊椎動物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5’端的非編碼區(qū)，并成簇存在。甲基化位點可隨DNA的復(fù)制而遺傳，因為DNA復(fù)制后，甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點進行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。DNA甲基化可引起基因組中相應(yīng)區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,使DNA失去核酶限制性內(nèi)切酶的切割位點,。
DNA甲基化一直以來都是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點之一。DNA甲基化（Methylation）是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase, 縮寫DNMT）的作用下，基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 縮寫5mC）。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能抑制某些基因的表達。在哺乳動物中，基因組DNA的甲基化可分為兩種類型：維持甲基化（maintenance DNA methylation）和重新甲基化（de novo methylation）。維持甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下，DNA的半保留復(fù)制過程中，會在子鏈的相應(yīng)的位置進行甲基化修飾的過程。重新甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下，原來沒有甲基化的DNA雙鏈上，進行甲基化的過程，之后由維持甲基化酶來維持穩(wěn)定的DNA甲基化狀態(tài)。對于這兩種甲基化機制來說，有兩種對應(yīng)類型的甲基化酶：維持甲基轉(zhuǎn)移酶和重新甲基轉(zhuǎn)移酶。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。河南目標(biāo)甲基化重測序哪個公司做
亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。目標(biāo)甲基化重測序準(zhǔn)確度高
全基因組重亞硫酸鹽測序（whole genome bisulfite sequencing，WGBS）用于全基因組DNA甲基化檢測：表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對于染色體構(gòu)象、基因表達調(diào)控機制有著重要影響，而全基因組DNA甲基化研究是表觀基因組學(xué)關(guān)注的重要內(nèi)容。Bisulfite處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U，進行PCR擴增后變成T，與原本具有甲基化修飾的C堿基區(qū)分開來，再結(jié)合高通量測序技術(shù)，可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。目標(biāo)甲基化重測序準(zhǔn)確度高
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