片段長(zhǎng)度多態(tài)性(限制性內(nèi)切酶)法——RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism)法的基本原理是通過(guò)PCR擴(kuò)增目的片段DNA,擴(kuò)增產(chǎn)物再用特異性內(nèi)切酶酶切成不同大小的片段,直接通過(guò)凝膠電泳分辨基因型。不同等位基因的限制性酶切位點(diǎn)分布不同,產(chǎn)生不同長(zhǎng)度的DNA*段條帶。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司上海翼和**團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。微信公眾號(hào):上海翼和生物但是當(dāng)位點(diǎn)數(shù)和樣本量都比較大的時(shí)候,長(zhǎng)片段PCR增加成本,工作量也非常龐大了。江蘇高同源序列SNP分型
Hi-SNP結(jié)合多重PCR技術(shù)和高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)需要檢測(cè)的位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物,在單管內(nèi)進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,不同的樣本以不同的Barcode引物區(qū)分。混合樣本后,在Ion Proton/Ion Torrent平臺(tái)上,對(duì)擴(kuò)增子進(jìn)行高通量測(cè)序。測(cè)序結(jié)果使用生物信息學(xué)方法,區(qū)分不同的樣本,,終獲得每個(gè)位點(diǎn)的SNP信息。高通量測(cè)序能一次對(duì)幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定,相比其他的SNP檢測(cè)技術(shù),基于高通量測(cè)序的SNP分型具有更準(zhǔn)確、更靈敏的特點(diǎn)。上海翼和生物提供高同源區(qū)段SNP分型服務(wù)。
南京高同源區(qū)段SNP分型送樣要求多重長(zhǎng)片段巢式PCR技術(shù),可以高效特異性捕獲高同源區(qū)段序列,將高同源區(qū)段問(wèn)題轉(zhuǎn)換為常規(guī)SNP位點(diǎn)。
上機(jī)測(cè)序后,每個(gè)樣本同一個(gè)SNP位置可以讀到數(shù)十或數(shù)百條reads(具體取決于測(cè)序通量),并且能夠清晰看到每條序列的具體信息,通過(guò)對(duì)SNP位點(diǎn)的聚類分析,實(shí)現(xiàn)位點(diǎn)基因型的判斷。大規(guī)模樣本中二等位基因reads比分布結(jié)果,每一個(gè)點(diǎn)**一個(gè)樣本一個(gè)SNP位點(diǎn)的聚類結(jié)果,兩端表示純和,中間表示雜合(理想情況,1/0表示純和,0.5表示雜合)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司上海翼和**團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。微信公眾號(hào):上海翼和生物
SNP基因分型技術(shù)原理是PCR擴(kuò)增含有SNP的基因組片段,主要特點(diǎn)是準(zhǔn)確性高、靈活性強(qiáng)、通量大,主要方法是TaqMan探針?lè)āJ紫韧ㄟ^(guò)PCR擴(kuò)增含有SNP的基因組片段,然后通過(guò)序列特異性引物實(shí)現(xiàn)單堿基延伸,隨后樣品分析物與芯片基質(zhì)共結(jié)晶后在真空管中受瞬時(shí)納秒 (10-9s) 強(qiáng)激光激發(fā)。核酸分子因此解吸附成為單電荷離子,由于電場(chǎng)中離子飛行時(shí)間與離子質(zhì)量成反比,通過(guò)檢測(cè)核酸分子在真空管中的飛行時(shí)間而獲得樣品分析物的精確分子量,從而檢測(cè)出SNP位點(diǎn)信息。多重長(zhǎng)片段PCR技術(shù),結(jié)合了長(zhǎng)片段PCR和多重PCR的優(yōu)勢(shì),是解決多個(gè)高同源區(qū)段SNP分型分析的有效手段。
網(wǎng)絡(luò)版本的NCBI在內(nèi)的很多網(wǎng)站都提供了在線的blast服務(wù),是**經(jīng)常用到的blast服務(wù)。網(wǎng)絡(luò)版本的NCBI優(yōu)點(diǎn):方便,容易操作,數(shù)據(jù)庫(kù)同步更新等優(yōu)點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)版本的NCBI缺點(diǎn):不利于操作大批量的數(shù)據(jù),同時(shí)也不能定義搜索的數(shù)據(jù)庫(kù)。單機(jī)版本的NCBI 通過(guò)NCBI的ftp站點(diǎn)獲得。獲得程序的同事必須取相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)才能在本地進(jìn)行BLAST分析。單機(jī)版本的NCBI優(yōu)點(diǎn):可以處理大批的數(shù)據(jù),可以自己定義數(shù)據(jù)庫(kù)。單機(jī)版本的NCBI缺點(diǎn):需要耗費(fèi)本地機(jī)的大量資源,此外操作也沒(méi)有網(wǎng)絡(luò)版直觀、方便,需要一定的計(jì)算機(jī)操作水平。由于SNP的二態(tài)性,非此即彼,在基因組篩選中SNPs往往只需+/-的分析這就利于發(fā)展自動(dòng)化技術(shù)篩選或檢測(cè)SNPs.河南同源序列SNP分型
二代測(cè)序SNP分型,針對(duì)同源片段數(shù)量比較少的區(qū)段,PCR擴(kuò)增后建庫(kù)時(shí),隨機(jī)抽樣抽到目的片段的概率比較高。江蘇高同源序列SNP分型
LDR連接酶檢測(cè)法優(yōu)點(diǎn)是適用于任何多態(tài)性位點(diǎn),基于雜交反應(yīng)和連接反應(yīng),分型結(jié)果準(zhǔn)確,可進(jìn)行多重反應(yīng),性價(jià)比較高,且實(shí)驗(yàn)靈活。但是相比TaqMan和直接測(cè)序法的單一位點(diǎn)檢測(cè)而言,LDR法可以實(shí)現(xiàn)多位點(diǎn)的同時(shí)檢測(cè),提高檢測(cè)通量,因此前期需要一定時(shí)間構(gòu)建多重分型方案。因此該方法非常適合相同分型方案,連續(xù)樣本的分型需求,提高實(shí)驗(yàn)通量的同時(shí)降低分型單價(jià)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司總部在上海,2011年無(wú)錫成立分公司無(wú)錫翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司江蘇高同源序列SNP分型
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司致力于醫(yī)藥健康,是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)分為細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù)等,目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn),為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司注重以質(zhì)量為中心,以服務(wù)為理念,秉持誠(chéng)信為本的理念,打造醫(yī)藥健康良好品牌。翼和生物立足于全國(guó)市場(chǎng),依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力,融合前沿的技術(shù)理念,飛快響應(yīng)客戶的變化需求。