安徽目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測序準(zhǔn)確度高

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-25

DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。表觀遺傳屬于一種可以對(duì)環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機(jī)制。機(jī)體細(xì)胞在經(jīng)歷脅迫、創(chuàng)傷等環(huán)境變化后,會(huì)產(chǎn)生特定的應(yīng)答,并往往會(huì)用DNA甲基化、組蛋白修飾等形式將應(yīng)激的模式記錄在DNA修飾中。這種脅迫記憶可以幫助細(xì)胞在面臨下一次應(yīng)激的時(shí)候快速適應(yīng)。同時(shí),這種表觀修飾可以通過遺傳的方式傳遞給下一代細(xì)胞。對(duì)于高等動(dòng)植物,通常壽命都比較漫長。在漫長的一生中,一方面機(jī)體會(huì)經(jīng)歷大量的環(huán)境應(yīng)答,另一方面細(xì)胞將會(huì)分裂多代。那么機(jī)體就更需要將應(yīng)答的信息,存儲(chǔ)在DNA甲基化中傳遞給后代的細(xì)胞,以提高這個(gè)物種的環(huán)境適應(yīng)能力。以MethlyC-seq為例,將DNA段化后收集特定長度的片段并修復(fù)DNA末端.安徽目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測序準(zhǔn)確度高

DNA(主要是CpG的)甲基化是其遺傳機(jī)制和表型效應(yīng)**為明確的表觀遺傳性機(jī)制。DNA甲基化譜式的變化不僅指導(dǎo)在正常發(fā)育過程中細(xì)胞譜系特化所依據(jù)的基因組轉(zhuǎn)錄譜式的改變,且在疾病發(fā)生和發(fā)展的基因表達(dá)異化中起著決定性的作用。為了高效準(zhǔn)確的分析基因組中所有的甲基化位點(diǎn),可采用全基因組甲基化(Whole Genome Bisulfite Sequence,WGBS)。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一,包括基于序列、熔化溫度和交互的分析,WGBS是通過重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ║),而甲基化的胞嘧啶保持不變,再經(jīng)PCR將U轉(zhuǎn)變?yōu)門,結(jié)合NGS便可高效準(zhǔn)確地分析基因組中所有甲基化位點(diǎn)。杭州目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測序公司上海翼和生物甲基化測序采用的是重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測序法,重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標(biāo)方法。

DNA甲基化即在DNA上增加甲基基團(tuán),是使基因的轉(zhuǎn)錄抑制或沉默的主要方式。該修飾特異性地發(fā)生在CpG位點(diǎn),胞嘧啶通過磷酸鹽與鳥苷酸連接(圖1)。甲基基團(tuán)的插入改變了DNA的表觀和結(jié)構(gòu),可能會(huì)直接阻礙DNA的識(shí)別及與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合,或者吸引其他因子優(yōu)先與DNA結(jié)合,干擾轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合。目前已鑒定了三個(gè)與甲基化DNA結(jié)合的蛋白家族,包括MBD蛋白、Kaiso和Kaiso樣蛋白、以及SRA蛋白。通過招募這些蛋白,DNA甲基化可促進(jìn)某些組蛋白狀態(tài)的維持,如去乙酰作用,從而保持轉(zhuǎn)錄后的組蛋白修飾。例如,MBD家族的甲基CpG結(jié)合蛋白2(MeCP2)與甲基CpG結(jié)合,招募HDACs,可促使染色體濃縮和轉(zhuǎn)錄抑制。

DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學(xué)修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。所謂DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下,在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5號(hào)碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。大量研究表明,DNA甲基化能引起染結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。WGBS是基于重亞硫酸鹽的甲基化分析方法,首先通過Bisulfite對(duì)樣本DNA進(jìn)行處理,將未甲基化的C堿基轉(zhuǎn)化為U堿基,而甲基化的C堿基則不會(huì)改變,進(jìn)行PCA擴(kuò)增后U堿基會(huì)變成T,與原本甲基化的C堿基區(qū)分開,再結(jié)合高通量測序技術(shù),可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。重亞硫酸氫鈉測序法(Bisulfite sequencing,BS-Seq)被認(rèn)為是5mC鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要形式,甲基化模式的異常促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,參與tumour演進(jìn)。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型,一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化,基因組不穩(wěn)定性增加;另一方面啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化,引起抑cancer基因及錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)沉默,導(dǎo)致tumour的發(fā)生。研究表明,基因組的低甲基化隨著細(xì)胞惡性度的增加而愈加明顯,是病情診斷的重要指標(biāo);此外,CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細(xì)胞惡變之前,能在早期預(yù)測tumour的發(fā)生,其也能有效地預(yù)測tumour的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此,檢測tumour發(fā)生中相關(guān)基因的甲基化模式具有重要意義,現(xiàn)就近年來中外文獻(xiàn)報(bào)道的甲基化檢測方法進(jìn)行簡要的分析總結(jié)。5甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine, 5mC)是一種常見的DNA修飾類型,能調(diào)節(jié)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)座子及染色體的狀態(tài)等。南京目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序機(jī)構(gòu)

基因甲基化幾乎發(fā)生在CpG島(70%啟動(dòng)子)會(huì)損害轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,發(fā)生在基因區(qū)間能抑制有害元件的表達(dá)。安徽目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測序準(zhǔn)確度高

全基因組重亞硫酸鹽甲基化測序(WGBS)可以在全基因組范圍內(nèi)精確的檢測所有單個(gè)胞嘧啶堿基(C堿基)的甲基化水平,是DNA甲基化研究的金標(biāo)準(zhǔn)。WGBS能為基因組DNA甲基化修飾的研究提供重要技術(shù)支持,能廣泛應(yīng)用在個(gè)體發(fā)育、衰老和cancer發(fā)生等生命過程的機(jī)制研究中。其原理是用 Bisulfite 處理DNA序列,首先將基因組中未發(fā)生甲基化的 C 堿基轉(zhuǎn)換成U(T),從而與原本具有甲基化修飾的堿基C區(qū)分開來,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)合高通量測序技術(shù),適用于全基因組范圍內(nèi)繪制單堿基分辨率的DNA 甲基化圖譜。安徽目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測序準(zhǔn)確度高

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