我們食品微生物檢測過程中,除了我們知道要檢測的目標微生物之外,往往會出現(xiàn)一些和目標微生物表現(xiàn)不一,但你又想知道它是什么菌屬的情況,特別是對于一些生產(chǎn)企業(yè),有時候往往會懷疑是否是因為這個“非目標菌”的存在,從而影響到了產(chǎn)品質(zhì)量。那怎么去鑒定那些“非目標”微生物呢?又有哪些方法和手段可以采用呢?傳統(tǒng)的細菌系統(tǒng)分類,也就是常說的鑒定,通常是通過純培養(yǎng)分離后從形態(tài)學、生理生化反應特征以及免疫學特性(血清學分析)進行鑒定。這也是我們目前國標中常用的鑒定手段,這種方法的優(yōu)點就是所用試劑簡單易得,常規(guī)實驗室即可展開,經(jīng)濟實用,缺點呢,就是鑒定所需時間較長,且容易判斷不準確。用這種方法,要先進行革蘭氏染色,從鏡檢分析其可能的微生物種屬,再根據(jù)判斷結(jié)果,按照《伯杰氏手冊》上的生化項目進行實驗,確定其可能的微生物種屬。比如,鏡檢是革蘭氏陽性桿菌,且周圍或菌體頂端有芽孢產(chǎn)生,這時候我們就要往芽孢桿菌的方向去進行生理生化鑒定。生化方法檢測病原微生物,是測定微生物特異性酶。成都隨機PCR未知病原檢測要多久
實現(xiàn)病原微生物種類鑒定的技術(shù)手段:病原微生物的研究歷史不算長。發(fā)展至今已經(jīng)有了成套的檢測體系。利用不同類別的微生物有其本身不同于其他微生物的特點,如從培養(yǎng)形態(tài)、顯微鏡觀測形態(tài)、生物學功能、致病性、生物化學反應、抗原抗體反應、核酸序列等方面,都可以進行相當程度的鑒別。即便如此,依然有很多微生物通過傳統(tǒng)技術(shù)無法鑒別。高通量測序技術(shù)問世,給微生物鑒別打開一扇新的大門。它對核酸進行測序是非特異的,因此,對一無所知的核酸也可以實現(xiàn)鑒別。成都隨機PCR未知病原檢測要多久有很多微生物通過傳統(tǒng)技術(shù)是無法鑒別的。
傳統(tǒng)的微生物檢測方法:1、直接顯微鏡觀察,正常情況,在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度以及培養(yǎng)時間),同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征??梢酝ㄟ^顯微鏡觀察菌落特征對微生物種類進行判斷。2、選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物或人為提供有利于目的菌株生長的條件,選擇培養(yǎng)基,其作用是允許特定種類的微生物生長,同時控制或阻止其他微生物生長。選擇培養(yǎng)一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特征進行間接判斷,得到的微生物往往并不只有一種,但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特征從而對其分類。3、鑒別培養(yǎng)基,根據(jù)微生物的代謝特點,在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品。與選擇培養(yǎng)相比,鑒別培養(yǎng)基的鑒別所得結(jié)果的范圍比較小,一般可直接測定某微生物的種類。
微生物鑒定能用微生物對噬菌體的敏感性作為指標來鑒定微生物的種屬。因為各種噬菌體都有其嚴格的宿主范圍,不同的細菌作為噬菌體的宿主對應有特定的已知特性的噬菌體,其和噬菌體的作用方式也有接合,轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)接,溶原性轉(zhuǎn)換和原生質(zhì)體融合等多種方式。部分細菌可以采用血清學反應的方法來進行區(qū)分和鑒別,就比如說常見的疑似傷寒沙門菌的菌種鑒別,我們可以利用血清學反應,現(xiàn)有的已知的對應的血清學反應抗體,蘸取菌種液在抗體液中涂抹,看是否會出現(xiàn)血凝現(xiàn)象(即是否出現(xiàn)淡白色的凝集顆粒)。傳統(tǒng)的微生物檢測方法:選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物或人為提供有利于目的菌株生長的條件,選擇培養(yǎng)基。
微生物鑒定系統(tǒng):微生物鑒定系統(tǒng)的工作原理因不同的儀器和系統(tǒng)而異。不同的細菌對底物的反應不同是生化反應鑒定細菌的基礎,而試驗結(jié)果的準確度取決于鑒定系統(tǒng)配套培養(yǎng)基的制備方法、培養(yǎng)物濃度、孵育條件和結(jié)果判定等。大多微生物鑒定系統(tǒng)采用細菌分解底物后反應液中pH的變化,色原性或熒光原性底物的酶解,測定揮發(fā)或不揮發(fā)酸,或識別是否生長等方法來分析鑒定細菌。藥敏試驗分析系統(tǒng)的基本原理是將微量稀釋在條孔或條板中,加入菌懸液孵育后放入儀器或在儀器中直接孵育,通過測定細菌生長的濁度,或測定培養(yǎng)基中熒光指示劑的強度或熒光原性物質(zhì)的水解,觀察細菌的生長情況。在含有培養(yǎng)基中,濁度的增加。病原微生物檢測的不可知性使得高通量測序成為研究這類病原微生物的有用工具。成都隨機PCR未知病原檢測要多久
未知病原微生物樣本需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學分析這三大基本流程才能完成鑒定。成都隨機PCR未知病原檢測要多久
病毒鑒定常用方法:病原學檢測主要適用于急性期血液標本,一般認為發(fā)病7天內(nèi)檢測陽性率高。(1)核酸檢測:采用熒光定量RT-PCR方法,是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。(2)病毒分離:將標本接種于蚊源細胞(C6/36)或哺乳動物細胞(BHK21、Vero)進行分離培養(yǎng),出現(xiàn)病變以后,用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進行病毒分離。血清學檢測:(1)血清特異性IgM抗體:發(fā)病3天后可檢出病毒特異IgM抗體,但發(fā)病7天后檢出率高??刹捎肊LISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性,提示患者可能新近寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應,易于產(chǎn)生假陽性。(2)中和抗體:采用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒,可以確診。成都隨機PCR未知病原檢測要多久