PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。由于PEI在細胞內不可降解,所以分子量越高,細胞毒性越強。此外,具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物,使其更容易轉染,但更難在細胞內釋放核酸。另一方面,PEI產生的復合物分子量降低,更難以轉染;但它更容易釋放核酸。因此,確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現的。然而,一些改進使PEI在應用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯,可***降低細胞毒性并保持較高的轉染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺,伯胺的乙?;蛟诰酆衔锝Y構中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團,可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產生的化學物質在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。新疆轉染試劑毒性低
目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***,如實體瘤和大腦。通常情況下,只能到達并轉染細胞的外層,從而導致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV),一種人類**病原體,似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm),起源于內吞。在被釋放到細胞外環(huán)境后,由于其表面存在細胞識別分子,它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體,通過經歷細胞內化和釋放的幾個周期,能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌,包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯蛋白)并啟動脂質體和外泌體之間的融合事件來實現。廣西轉染試劑幫轉染不同種類的納米顆粒轉染細胞系后,產生不同的效率、毒性和組織特異性。
轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里,轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發(fā)現可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外,轉染可以作為基因***中的策略之一,用于***無法***的遺傳性遺傳病。***,生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中,這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA,如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩(wěn)定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩(wěn)定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中,或在宿主核中作為染色體外元件維持一個外源載體來維持轉基因的長期表達。該轉基因可然后通過細胞的復制進行本構性表達。相比之下,瞬時轉染不需要將核酸整合到宿主細胞基因組中。核酸可以以質粒的形式或寡核苷酸的形式轉染。因此,隨著宿主細胞的復制,轉基因表達**終會丟失。瞬時轉染通常用于短期研究,以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下,穩(wěn)定轉染在需要大規(guī)模蛋白質生產的長期遺傳和藥理學研究中很有用。
化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體?;谥|體的轉染試劑是一種化學物質,它能夠形成帶正電的脂質聚集體,這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合,從而允許外來遺傳物質以**小的阻力進入。另一方面,非脂質體轉染試劑可進一步分為幾類,包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質體。磷酸鈣是轉染中使用的低價的化學物質之一,轉染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負電的核酸結合,形成沉淀,然后被宿主細胞吸收。然而,磷酸鈣轉染的成功率較低,需要事先優(yōu)化才能達到較高的轉染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機大分子,可以與核酸形成復合物,作為一種替代的非脂質體轉染試劑,它優(yōu)于磷酸鈣。然而,使用樹狀大分子的轉染效率仍然低于病毒載體和脂質體試劑。陽離子聚合物也可以與帶負電荷的核酸形成復合物,這有助于細胞通過內吞作用吸收遺傳物質。與病毒載體相比,陽離子聚合物產生的細胞毒性較小,但效率也較低。納米顆粒由于其體積小,增強了核酸進入宿主細胞的能力,正在成為非脂質體轉染的替代選擇。與DNA轉染類似,RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。
超聲輔助轉染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔,以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似,超聲照射的暴露時間、脈沖數和密度也被報道與轉染效率成比例相關,直至達到閾值。超過耐受極限,細胞存活率和轉染效率可能會下降。同樣,增加核酸的數量也可以提高超聲輔助轉染的轉染效率。在同一項研究中,超聲轉染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而,這一觀察結果與另一項研究的結果不一致,該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉染大鼠細胞數量沒有***差異。值得注意的是,后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉染后保持較高的細胞活力。然而,這兩項研究的不一致結果表明,超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉染效率因使用的細胞類型而異,Hela和T-24細胞系的超聲轉染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此,細胞類型的選擇是影響超聲轉染效率的另一個因素。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。中國臺灣廈門轉染試劑
基于病毒的轉染,或者更具體地稱為轉導,涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細胞。新疆轉染試劑毒性低
PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的,是***個用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中,PHP可以在不到兩個小時的時間內失去其初始分子量的50%。然而,PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間,分解產物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快,但與DNA絡合時更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復合物轉染CPAE細胞,測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉運聚合物,PHP酯的轉染效率與聚L-賴氨酸相當。轉染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉染細胞的能力不受FBS存在的影響。結果表明,PHP酯是一種潛在的基因載體。新疆轉染試劑毒性低