貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學研究

來源: 發(fā)布時間:2022-01-15

定量蛋白質(zhì)組學技術(shù):TMT定量蛋白組學技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)多肽體外標記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標簽,特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學技術(shù)是多肽體外標記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學技術(shù)相似,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)療和健康方面有什么應用?貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學研究

定量蛋白質(zhì)組學技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)主要分為標記(label)和非標記(labelfree)定量策略,標記策略又分為體內(nèi)標記和體外標記兩種。細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達異常。定量蛋白質(zhì)組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質(zhì)或一個復雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進行精確的定量和鑒定。非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術(shù),Labelfree定量蛋白組學技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內(nèi)部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質(zhì)進行相對定量。南京醫(yī)學蛋白質(zhì)組學項目蛋白質(zhì)組學是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學。

定量蛋白質(zhì)組學分析:特點:(1)不同樣本標記之后混樣,統(tǒng)一處理上機,減少了分別上機造成的實驗誤差,并利用同位素標簽的豐度來檢測,定量更準確,重復性更好;(2)由于需要標記試劑標記,因此成本相對較高;(3)通量高,在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品;(4)利用基于同一個參考樣品的辦法,可以進行多于8個樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學分析:Label-Free定量,即非標記的定量蛋白質(zhì)組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。

非標定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化,認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關,因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進行定量。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標記方法,發(fā)展比較早,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎,各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標記定量的原理是以MS1為基礎,計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。蛋白質(zhì)組與基因組相對應,也是一個整體的概念。

我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學呢?抗體免疫的方法呢,其實就是ELISA,Western及蛋白質(zhì)芯片。通過合成大量蛋白質(zhì)特異的抗體,能夠進行定性檢測及相對定量分析,只要你有好用的抗體,那么就可以通過免疫反應讓抗體快速的識別你感興趣的蛋白質(zhì),然后用例如HRP發(fā)光等標記方法顯示它們是否存在于你的樣品當中。現(xiàn)在已有的抗體不只能識別特定蛋白質(zhì),還能識別特定修飾的特定蛋白質(zhì)或者被特定修飾過的特定蛋白質(zhì)Motif。蛋白質(zhì)組與基因組相對應,也是一個整體的概念。蛋白質(zhì)組學技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。河南蛋白質(zhì)定量組學服務

蛋白質(zhì)組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學研究

定量蛋白質(zhì)組學的方法學背景和意義:從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達水平變化的研究,識別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標志物,這些研究都需要對蛋白質(zhì)進行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段?;谫|(zhì)譜技術(shù),科學家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學方法,來了解細胞、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動力學。貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學研究

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