蛋白質磷酸化修飾組學:蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種比較普遍的調控手段。蛋白質的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調控、細胞凋亡、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程,并且可逆的蛋白質磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉導方式。目前已經知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位。濟南乙?;揎椀鞍踪|組學主要方式
翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質進行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質在翻譯中或翻譯后經歷的一個共價加工過程。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團或通過蛋白質水解去基團而改變蛋白質的性質,調節(jié)蛋白質的功能。經過翻譯后修飾的蛋白質稱為翻譯后修飾蛋白。目前,已知的蛋白質翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙?;?、泛素化、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等。棕櫚?;揎椀鞍踪|組學蛋白質糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質上的過程。
蛋白質乙酰化修飾鑒定流程:1. 組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 使用高效特異性乙?;贵w對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。4. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行鑒定分析。5. 數(shù)據(jù)分析,并對鑒定的乙酰化位點的生物學功能進行解釋預測。隨著蛋白質組研究的發(fā)展,我們越來越深刻地意識到,對于生物體生命活動的管理和調控過程,密切相關的不只是單個蛋白質層面的修飾狀態(tài),更重要的是研究蛋白質組學水平研究在翻譯后修飾的動態(tài)變化。高質、高效的蛋白質翻譯后修飾富集技術和豐富的、準確的定量手段使得研究蛋白質水平的翻譯后修飾組學成為現(xiàn)實,借助這些組學研究手段能夠實現(xiàn)不同生理病理狀態(tài)下生物樣本在翻譯后修飾水平上的定量比較,深入地揭示翻譯后修飾水平的波動與生物生命活動的密切聯(lián)系。
翻譯后修飾蛋白組學分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設這個肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質譜圖進行二次確認。蛋白質翻譯后修飾可以改變蛋白質的物理、化學性質。
蛋白質乙?;揎椊M學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(基于SILAC的乙?;揎椊M學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學定量)。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙酰化修飾水平差異,并對產生變化的生物學意義進行解釋。蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題?江蘇氧化修飾蛋白質組學分析價格
蛋白質磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術。濟南乙?;揎椀鞍踪|組學主要方式
蛋白質翻譯后修飾有什么生物學意義?可以使蛋白質具有生物活性,可以發(fā)揮相應的功能。翻譯是蛋白質生物合成(基因表達中的一部分,基因表達還包括轉錄)過程中的第二步(轉錄為第1步),翻譯是根據(jù)遺傳密碼的中心法則,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過轉錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對應的特定氨基酸序列的過程。但也有許多轉錄生成的RNA,如轉運RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列。濟南乙酰化修飾蛋白質組學主要方式
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