單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)：Anydeplete技術(shù)首先通過(guò)隨機(jī)引物進(jìn)行一鏈合成，一鏈合成引入核苷酸類(lèi)似物，用于酶切打斷，二鏈合成同樣引入核苷酸類(lèi)似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭，接頭一條鏈也帶有核苷酸類(lèi)似物，用于酶切降解。當(dāng)形成單鏈文庫(kù)后，設(shè)計(jì)特異性引物與rRNA形成文庫(kù)結(jié)合，一輪退火延伸，rRNA文庫(kù)形成雙鏈結(jié)構(gòu)。Reverseadaptor上帶有特異的酶切位點(diǎn)，當(dāng)形成雙鏈結(jié)構(gòu)酶切位點(diǎn)被識(shí)別，切去接頭，這樣rRNA形成的文庫(kù)不帶有完整的接頭，而其他文庫(kù)帶有完整接頭，通過(guò)PCR擴(kuò)增富積既能得到想要的信息，包含mRNA及LncRNA信息。同樣Anydeplete技術(shù)與10×genomics技術(shù)一樣，包含分子標(biāo)簽，可分析duplication及PCR產(chǎn)生突變位點(diǎn)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于炎癥發(fā)生機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。貴陽(yáng)外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢(shì)?轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序具有以下優(yōu)勢(shì)：（1）可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度，同時(shí)不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號(hào)帶來(lái)的交叉反應(yīng)和背景噪音問(wèn)題；（2）靈敏度高，可以檢測(cè)細(xì)胞中少至幾個(gè)拷貝的稀有轉(zhuǎn)錄本；（3）可以對(duì)任意物種進(jìn)行全基因組分析，無(wú)需預(yù)先設(shè)計(jì)特異性探針，因此無(wú)需了解物種基因信息，能夠直接對(duì)任何物種進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，同時(shí)能夠檢測(cè)未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉(zhuǎn)錄本，并準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及cSNP，UTR區(qū)域。（4）檢測(cè)范圍廣，高于6個(gè)數(shù)量級(jí)的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍，能夠同時(shí)鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本。江蘇宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組定性分析轉(zhuǎn)錄組具有空間特異性的特點(diǎn)。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)：10×genomics技術(shù)：首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段，DNA的片段由三部分組成：Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個(gè)堿基的長(zhǎng)度。一共有400萬(wàn)種Barcode，一個(gè)微珠是對(duì)應(yīng)于一種Barcode，通過(guò)這400萬(wàn)種Barcode，可以把凝膠微珠給區(qū)分開(kāi)（通過(guò)barcode可以把cell分開(kāi)）。UMI是一段隨機(jī)序列，也就是說(shuō)每一個(gè)DNA分子，都有自己的UMI序列（一個(gè)微珠上有很多種UMI，通過(guò)UMI可以把RNA分子分開(kāi)，并可以標(biāo)記RNA分子的數(shù)量）。10個(gè)堿基長(zhǎng)的UMI，有100萬(wàn)種序列的變化（4^10=1,048,576），UMI的作用是為了區(qū)分哪些reads是來(lái)自于一個(gè)原始cDNA分子區(qū)分基因片段重復(fù)還是duplication及區(qū)分是真實(shí)的SNP位點(diǎn)還是PCR產(chǎn)生的突變。通過(guò)10×genomics儀器將單個(gè)細(xì)胞與單個(gè)凝膠微珠通過(guò)油相混在一起，形成油包水的小微滴。
單細(xì)胞RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)工作流程：?jiǎn)渭?xì)胞RNA測(cè)序等高通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)通常從針對(duì)不同瘤和組織類(lèi)型（解離、分選和分離細(xì)胞等）量身定制的實(shí)驗(yàn)工作流程開(kāi)始，然后產(chǎn)生可以比對(duì)的序列，量化、質(zhì)量控制(QC)過(guò)濾和以不同方式標(biāo)準(zhǔn)化，以實(shí)現(xiàn)許多下游計(jì)算分析，例如聚類(lèi)分析以識(shí)別轉(zhuǎn)錄不同的細(xì)胞類(lèi)型和亞群，等位基因分析以識(shí)別單核苷酸變異（SNV，用星號(hào)表示）或拷貝數(shù)變體（CNV）、軌跡分析、剪接檢測(cè)或瘤的微環(huán)境（TME）相互作用的推斷中。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的分析通常因精心設(shè)計(jì)的研究設(shè)計(jì)而變得復(fù)雜，這些設(shè)計(jì)可能包括來(lái)自患病和未患病個(gè)體的樣本、在不同時(shí)間點(diǎn)（例如，診療前和診療后）收集的同一個(gè)人的多個(gè)樣本，或來(lái)自表現(xiàn)出不同疾病狀態(tài)的不同個(gè)體的多個(gè)樣本。這樣的研究設(shè)計(jì)可以發(fā)現(xiàn)患者共享的轉(zhuǎn)錄特征，這些特征可能定義疾病中常見(jiàn)的干擾分子途徑。轉(zhuǎn)錄組學(xué)能準(zhǔn)確地識(shí)別可變剪切位點(diǎn)及cSNP，UTR區(qū)域。
全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?yàn)槭裁葱枰獦?gòu)建兩個(gè)文庫(kù)？全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要構(gòu)建2個(gè)測(cè)序文庫(kù)，一個(gè)小RNA文庫(kù)和一個(gè)去除核糖體RNA的鏈特異性文庫(kù)，然后分別上機(jī)測(cè)序。小RNA長(zhǎng)度較短，一般小于50nt，采用測(cè)序策略為50SE。其他三類(lèi)RNA序列一般大于200，通常在1000以上，可達(dá)幾萬(wàn)，通過(guò)片段化構(gòu)建150PE測(cè)序文庫(kù)。然后小RNA文庫(kù)可以獲得miRNA序列信息，去核糖體的鏈特異性文庫(kù)可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組學(xué)有高通量、更精確的數(shù)字信號(hào)。上海RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究?jī)?nèi)容
轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序必須做生物學(xué)重復(fù)么？貴陽(yáng)外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)的應(yīng)用：RNA-Seq即對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序和分析。一般來(lái)說(shuō)在研究所會(huì)委托公司測(cè)序得到數(shù)據(jù)自己進(jìn)行后續(xù)的生信分析（質(zhì)控，mapping，差異基因表達(dá)分析，SNV分析等）。RNA-Seq有著巨大的應(yīng)用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種，不同組織：研究基因在不同部分的表達(dá)情況。同一物種，同一組織：研究基因在不同處理下，不同條件下的表達(dá)變化。同一組織，不同物種：研究基因的進(jìn)化關(guān)系。時(shí)間序列實(shí)驗(yàn)：基因在不同時(shí)期的表達(dá)情況與發(fā)育的關(guān)系?；蚍诸?lèi)：找到細(xì)胞特異，疾病相關(guān)，處理相關(guān)的基因表達(dá)模式，用于診斷疾病和預(yù)測(cè)等?；蚓W(wǎng)絡(luò)和通路：基因在細(xì)胞活動(dòng)中的功能，基因間的相互作用。貴陽(yáng)外泌體microRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)質(zhì)譜鑒定
上海拜譜生物科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā)，發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大。目前我公司在職員工以90后為主，是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。上海拜譜生物科技有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋多組學(xué)服務(wù)，質(zhì)譜檢測(cè)，蛋白質(zhì)組學(xué)，代謝組學(xué)，堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針，贏得廣大客戶的支持和信賴。公司深耕多組學(xué)服務(wù)，質(zhì)譜檢測(cè)，蛋白質(zhì)組學(xué)，代謝組學(xué)，正積蓄著更大的能量，向更廣闊的空間、更寬泛的領(lǐng)域拓展。