湖北實(shí)驗(yàn)原代細(xì)胞構(gòu)建

    收藏查看我的收藏0有用+1已投票0細(xì)胞培養(yǎng)編輯鎖定本詞條由“科普中國(guó)”科學(xué)百科詞條編寫(xiě)與應(yīng)用工作項(xiàng)目審核。細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺　＜?xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。[1]中文名細(xì)胞培養(yǎng)外文名cellculture別名細(xì)胞克隆術(shù)語(yǔ)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)地位生物技術(shù)中基礎(chǔ)的技術(shù)常用培養(yǎng)基無(wú)鈣、鎂、離子溶液目錄1分類(lèi)2環(huán)境及條件?環(huán)境因素?營(yíng)養(yǎng)條件3設(shè)施器材4一般過(guò)程5具體步驟6注意事項(xiàng)細(xì)胞培養(yǎng)分類(lèi)編輯動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)高速冷凍離心機(jī)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞梭形，不規(guī)則，貼壁培養(yǎng)。湖北實(shí)驗(yàn)原代細(xì)胞構(gòu)建

    每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)組織來(lái)定，約1-2h；5.待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用40μm的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，收集；6.用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。常見(jiàn)問(wèn)題解答：Q：為什么我取得原代織，分離的卻不是細(xì)胞？A：取材時(shí)，我們要熟悉所需組織的類(lèi)型和部位特征，選擇細(xì)胞集中、活力較好的部分。避免結(jié)締等正常組織。Q：若是細(xì)胞中混成纖維細(xì)胞，如何去除？A：成纖維細(xì)胞的去除對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)十分重要。由于成纖維細(xì)胞貼壁速度細(xì)胞快，可利用反復(fù)貼壁法使二者分離，進(jìn)而達(dá)到成纖維細(xì)胞的目的。Q：為什么離心后，沒(méi)有細(xì)胞分離出來(lái)？A：需要考慮消化酶的因素，由于組織較致密，胰酶無(wú)法消化，一般選用膠原酶，如膠原酶Ⅳ。若是組織十分致密可以再結(jié)合機(jī)械法，如研磨或者攪拌加速細(xì)胞分散。如下表為二者的區(qū)別：膠原酶胰酶來(lái)源細(xì)菌胰臟消化組織纖維多的硬組織軟組織對(duì)細(xì)胞影響傷害小長(zhǎng)時(shí)間有損傷作用力度緩和強(qiáng)注：膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶，根據(jù)分離的組織類(lèi)型需選擇合適的膠原酶類(lèi)型。Q：消化時(shí)間如何確定？A：具體的消化酶的量和消化時(shí)間可根據(jù)組織類(lèi)型和多少進(jìn)行調(diào)整。Q：消化之前為什么用EDTA?A：EDTA是一種非酶消化物，又稱(chēng)螯合劑，對(duì)一些組織。湖南乳鼠原代細(xì)胞外包血管疾病發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)主要因素是由于血管平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。

    細(xì)胞檢測(cè)平臺(tái)可提供細(xì)胞增殖/細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移/細(xì)胞侵襲等細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)。通過(guò)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)可以對(duì)目的基因的生理功能及其相互作用進(jìn)行研究,是基礎(chǔ)科研及藥物研發(fā)中檢測(cè)物質(zhì)毒性、評(píng)估藥物安全性及有效性、的發(fā)生及增值等的重用手段。分子檢測(cè)平臺(tái)可提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、定點(diǎn)突變、載體構(gòu)建、種屬鑒定、質(zhì)粒提取等常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，此外憑借分子平臺(tái)專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì)多年經(jīng)驗(yàn)積累，可開(kāi)展基因編輯技術(shù)(CRSPRCas9)、miRNA靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)等特色技術(shù)服務(wù)。分子檢測(cè)應(yīng)用于科學(xué)研究及醫(yī)療診斷領(lǐng)域，為疾病的研究和診斷提供更準(zhǔn)確、更科學(xué)的信息和依據(jù)。為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，提供了一個(gè)強(qiáng)有力的技術(shù)平臺(tái)。蛋白檢測(cè)平臺(tái)可提供WB、IHC、IF、IP/CO-IP、ELISA等免疫學(xué)檢測(cè)服務(wù)。免疫學(xué)檢測(cè)是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理，利用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體或利用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，可以定性、定位和定量地檢測(cè)某一特異蛋白。這些方法為科研人員在研究諸如細(xì)胞信號(hào)通路、生理過(guò)程調(diào)控、代謝調(diào)節(jié)等方面提供重要手段。'病毒平臺(tái)可提供慢病毒包裝、腺病毒包裝、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選的技術(shù)服務(wù)。

    7)蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。(8)將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。5、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，多久更換一次培養(yǎng)基？這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。6、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類(lèi)細(xì)胞嗎？這取決于細(xì)胞的類(lèi)型。一些細(xì)胞類(lèi)型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類(lèi)型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過(guò)程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變。7、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化一方面是干細(xì)胞鑒定的主要方法。

    [1]細(xì)胞培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)條件1．培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基包含細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等。針對(duì)不同細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細(xì)胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血清、因子等。血清提供的是細(xì)胞外基質(zhì)、生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血清。要根據(jù)不同的細(xì)胞和不同的研究目的決定添加血清的比例。10%～20%的血清能維持細(xì)胞較快的生長(zhǎng)增殖速度，稱(chēng)為生長(zhǎng)培養(yǎng)液；為維持細(xì)胞緩慢生長(zhǎng)或不死，添加2%～5%的血清即可，稱(chēng)為維持培養(yǎng)液。但血清中也存在有害于細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的物質(zhì)，如補(bǔ)體、免疫球蛋白和一些生長(zhǎng)抑制因子；成分不明確，影響對(duì)結(jié)果的分析；不同動(dòng)物、不同批次的血清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。谷氨酰胺是細(xì)胞生長(zhǎng)重要的氮源，在細(xì)胞生長(zhǎng)代謝過(guò)程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。為防止污染，培養(yǎng)基中還需添加一定量的常用名稱(chēng)、濃度及敏感性如下表。為了后續(xù)實(shí)驗(yàn)成功進(jìn)行，我們對(duì)分離培養(yǎng)的細(xì)胞做一個(gè)細(xì)胞鑒定實(shí)驗(yàn)。云南豚鼠原代細(xì)胞培養(yǎng)

人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自臍帶動(dòng)脈，一般用于生理學(xué)和藥理學(xué)研究。湖北實(shí)驗(yàn)原代細(xì)胞構(gòu)建

    直至內(nèi)箱盒2的滑塊211與滑槽111的開(kāi)口處齊平為止，簡(jiǎn)單方便。需要說(shuō)明的是，滑槽111的正面及背面可同時(shí)存放內(nèi)箱盒2，即每一滑槽111內(nèi)可同時(shí)存放兩個(gè)內(nèi)箱盒2。所述外箱體1內(nèi)設(shè)有3列中空的矩形槽11，各所述矩形槽11的兩側(cè)分別設(shè)有15層對(duì)稱(chēng)的滑槽111。即，本實(shí)用新型總共可存放90個(gè)內(nèi)箱盒2。如圖3及圖4所示，進(jìn)一步的，為方便實(shí)驗(yàn)者存取內(nèi)箱盒2，所述滑槽111的高度大于滑塊212的高度，所述滑塊212的高度大于滑輪211的直徑。本實(shí)施例中，滑槽111的高度稍大于滑塊212的高度。如此，當(dāng)內(nèi)箱盒2的正面已接近收納至滑槽111內(nèi)時(shí)，滑塊212與滑槽111之間會(huì)產(chǎn)生一個(gè)移動(dòng)的阻力，導(dǎo)致內(nèi)箱盒2無(wú)法繼續(xù)順利的滑動(dòng)，從而提高內(nèi)箱盒2存放的穩(wěn)定性，避免外箱體1受到顛簸，內(nèi)箱盒2就滑脫掉落。如圖5所示，為營(yíng)造無(wú)菌無(wú)毒的培養(yǎng)環(huán)境，從而提高細(xì)胞培養(yǎng)的存活率，所述內(nèi)箱盒2包括底盒21、紫外燈23及上蓋22。所述紫外燈23設(shè)于底盒21內(nèi)，所述底盒21與上蓋22的一側(cè)通過(guò)合頁(yè)鉸接，所述底盒21與上蓋22的另一側(cè)通過(guò)鎖扣24扣合連接。紫外燈23具有殺菌消毒的作用，在每一內(nèi)箱盒2內(nèi)設(shè)有一紫外燈23，可為細(xì)菌培養(yǎng)皿單獨(dú)提供一個(gè)無(wú)菌無(wú)毒的培養(yǎng)環(huán)境，提高培養(yǎng)細(xì)胞的存活率。而鎖扣24的設(shè)置。湖北實(shí)驗(yàn)原代細(xì)胞構(gòu)建