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III)細胞系的大規(guī)模連續(xù)培養(yǎng)。該培養(yǎng)基主要用于培養(yǎng)和維護鱗翅類衍生細胞系和擴增這些細胞系的病毒。IPL-41培養(yǎng)基基礎也以用于無血清夜蛾細胞的桿狀病毒重組蛋白表達。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。目前用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計、配制的培養(yǎng)基。Eagle培養(yǎng)基是一種基本、適用范圍廣的培養(yǎng)基,是動物細胞培養(yǎng)中常用的培養(yǎng)基之一。遼寧正規(guī)細胞培養(yǎng)基生產產家
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基RPMI-1640是Moore等人于1967年在美國紐約州法羅市的羅斯韋爾公園紀念研究所(RoswellParkMemorialInstitute,RPMI)開發(fā)出來的,RPMI是該研究所開發(fā)的一類細胞培養(yǎng)基,1640是培養(yǎng)基代號。RPMI-1640是改進型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基,采用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),與大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方。RPMI-1640培養(yǎng)基**初是為淋巴細胞培訓專門設計的,現(xiàn)在已普遍應用于各種正常細胞和惡性**的培養(yǎng),包括HeLa細胞、Jurkat細胞、MCF-7細胞、PC12細胞、PBMC細胞、星形膠質細胞和惡性**,是采用極其普遍的培養(yǎng)基之一。RPMIRPMI1640培養(yǎng)基相比之下其他培養(yǎng)基之所以具與眾不同的功效,是因為其中富含還原劑谷胱甘肽和高濃度的維他命。RPMI1640培養(yǎng)基包含生物素、維他命B12以及PABA,這些成份是Eagle’sMEM和DMEM所不具備的。針對普遍的細胞培養(yǎng)應用,我們提供多種組分的RPMI1640改進培養(yǎng)基。廣東昆蟲細胞培養(yǎng)基供應商家DMEM培養(yǎng)基**初設計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型)。
Dulbecco’s改良培養(yǎng)基–DMEM(Dulbecco’sModifiedEagleMedium)是在MEM培養(yǎng)基的基礎上研制的,與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。DMEM培養(yǎng)基初設計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現(xiàn)已廣泛應用于各種細胞的培養(yǎng)。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,是體外培養(yǎng)中為預防微生物污染常用的***,其中,青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結合,抑制細菌蛋白質的合成,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預防絕大部分的細菌污染。本產品含有多類細胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質、脂類或任何生長因子,故此產品需搭配血清或無血清添加物使用。
動物細胞培養(yǎng)(animalcellculture)就是從動物機體中取出相關的組織,將它分散成單個細胞(使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶)然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖。細胞培養(yǎng)基的種類有哪些?按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞培養(yǎng)。2.神經元基礎培養(yǎng)基可為神經元生長提供基礎營養(yǎng)物質。IPL-41昆蟲培養(yǎng)基(IPL-41InsectMedium)旨在用于大規(guī)模擴增草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)細胞系,也常用于通過桿狀病毒表達系統(tǒng)(BEVS)進行蛋白表達。IPL-41培養(yǎng)基是對原始IPL配方的改良,由美國農業(yè)部昆蟲病理實驗室Weiss等人開發(fā),用于大規(guī)模擴增草地貪夜蛾衍生細胞系。Weiss向基礎培養(yǎng)基中加入了胎牛血清和TPB培養(yǎng)基(TryptosePhosphateBroth),成功地實現(xiàn)了IPL-21AE。Ham’s F-12營養(yǎng)混合物(Ham’s F-12 Nutrient Mixture)初用于CHO細胞的無血清培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方。McCoy’s5A培養(yǎng)基是改良的Basal Medium5A,McCoy’s 5A含有還原型谷胱甘肽、細菌蛋白胨以及高濃度的葡萄糖。河南昆蟲細胞培養(yǎng)基供應商家
針對細胞培養(yǎng)應用,我們提供多種組分的MCDB改良培養(yǎng)基。遼寧正規(guī)細胞培養(yǎng)基生產產家
MEMα是一種改良的MEM培養(yǎng)基,與MEM培養(yǎng)基相比MEMα培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富,在MEM的基礎上又添加了NEAA、**酸鈉、硫酸鋅、VB12、生物素、抗壞血酸等成分,廣泛應用于各種哺乳動物懸浮和貼壁細胞的培養(yǎng)。不含核苷和脫氧核苷的MEMα培養(yǎng)基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型細胞的篩選培養(yǎng)基。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Glu),又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽,是一種高級細胞培養(yǎng)添加劑,可直接替代細胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺。L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會自發(fā)降解生成氨和焦谷氨酸,其中氨對細胞有害;而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的穩(wěn)定,不會自發(fā)的降解。細胞利用其機制是:在細胞培養(yǎng)時,細胞會逐漸向培養(yǎng)液中釋放一種肽酶,將L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺,而后細胞會將這兩種水解產物吸收利用。細胞利用L-丙氨酰-L-谷氨酰的過程與流加培養(yǎng)策略相似,連續(xù)的將低濃度水平的L-谷氨酰胺加入到培養(yǎng)液中,從而提高了L-谷氨酰胺的利用率,且不會生成多余的氨,更利于細胞的生長。L-丙氨酰-L-谷氨??梢源娴饶柕腖-谷氨酰胺,適用于所有的細胞,幾乎無需適應。 遼寧正規(guī)細胞培養(yǎng)基生產產家
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