1.基本檢查:是確定精液變量穩(wěn)定的常規(guī)方法,不僅是男科實(shí)驗(yàn)室,任何開展精液檢查的實(shí)驗(yàn)室都能遵循。精子計(jì)數(shù)依然推薦使用改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的方法,但計(jì)數(shù)的方法有了改變。明確推薦了伊紅笨胺黑染色法作為精子存活率診斷的優(yōu)先方法,伊紅染色和低滲腫脹實(shí)驗(yàn)只作為備選方法。刪減了參考值下限的描述。對(duì)于精子活動(dòng)率大于40%的樣本沒有必要做存活率評(píng)估。與第5版手冊(cè)中淡粉色判讀為活精子不同,明確了只有精子頭為白色的精子為活精子、淡粉色為死精子。臨床數(shù)據(jù)表明,鑒別快速前向運(yùn)動(dòng)精子非常重要。因此,關(guān)于精子活力分級(jí),第6版手冊(cè)建議恢復(fù)到快速前向運(yùn)動(dòng)、慢速前向運(yùn)動(dòng)、非前向運(yùn)動(dòng)和不活動(dòng)4個(gè)活力級(jí)別,但精子活動(dòng)率的參考值范圍卻依然是按前向運(yùn)動(dòng)(PR)、非前向運(yùn)動(dòng)(NP)、不活動(dòng)(IM)3個(gè)活力級(jí)別計(jì)算。第6版手冊(cè)強(qiáng)調(diào),精子形態(tài)學(xué)評(píng)估的價(jià)值不僅在于其可用于判斷自然妊娠和輔助生殖技術(shù)(ART)結(jié)局的預(yù)后,還可以為男性生殖***包括睪丸和附睪功能判斷提供更多診斷信息。對(duì)于3%和5%的精子“正?!毙螒B(tài)率的判斷,則要求必須由訓(xùn)練有素的人員評(píng)估1500個(gè)精子來完成;對(duì)于無(wú)尾精子(只有頭部的精子)超過總精子數(shù)20%的精液,應(yīng)單獨(dú)計(jì)算并在報(bào)告中注明;精子分析,平均角位移(MAD)?:精子頭沿其曲線軌跡瞬時(shí)轉(zhuǎn)折角度的時(shí)均J對(duì)值?。廣州快速運(yùn)動(dòng)精子分析STR
人類精子冷凍保存和儲(chǔ)存:增加了冷凍樣本的安全性、精液冷凍保存方案、快速液氮熏蒸冷凍、冷凍精液的解凍、玻璃化冷凍等內(nèi)容,更具可操作性。本手冊(cè)對(duì)人類精子的冷凍保存提出了具體建議:將樣本分管分罐分開儲(chǔ)存;對(duì)使用的材料和留存標(biāo)本建立定期核驗(yàn)程序;所有儲(chǔ)罐都應(yīng)有液位監(jiān)控報(bào)警系統(tǒng),以監(jiān)測(cè)溫度和液氮液位,傳感器應(yīng)連接警報(bào)器,可通過實(shí)驗(yàn)室人員的終端進(jìn)行提醒。新證據(jù)表明,玻璃化冷凍是冷凍保存精液的一種有價(jià)值的方法。該方法的原理是將小體積樣本與無(wú)污染液氮直接接觸并快速冷凍,可以防止冰晶的形成,并減少精子的滲透性損傷。在麥管玻璃化冷凍(無(wú)菌玻璃化冷凍)中,也可以使用封閉系統(tǒng),不需要無(wú)菌的液氮。南京人精子分析頻閃光源計(jì)算機(jī)輔助精子分析根據(jù)初估的精子濃度選擇合適的檢測(cè)方法,確保檢測(cè)過程的準(zhǔn)確性和可靠性?。
方法:使用兩種已知濃度的質(zhì)控乳膠珠溶液,1份濃度為(35±5)×106/ml,另1份濃度為(18.0±2.5)×106/ml,評(píng)價(jià)4種計(jì)數(shù)方法的準(zhǔn)確性和精確性,并比較4種方法計(jì)數(shù)精液的結(jié)果。結(jié)果:計(jì)數(shù)乳膠珠時(shí),CellVU計(jì)數(shù)池的結(jié)果**接近已知濃度,分別為(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,變異系數(shù)(CV)值分別為12.80%和10.58%;血細(xì)胞計(jì)數(shù)池和Makler計(jì)數(shù)池結(jié)果均高于已知濃度,前者為(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分別為10.81%和8.89%,后者為(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分別為14.86%和14.96%;CASA系統(tǒng)結(jié)果低于已知濃度,為(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值比較低,分別為7.22%和6.50%。計(jì)數(shù)精液時(shí),CellVU計(jì)數(shù)池與CASA系統(tǒng)結(jié)果差異無(wú)***性(P=0.71),分別為(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血細(xì)胞計(jì)數(shù)池和Makler計(jì)數(shù)池結(jié)果差異無(wú)***性(P=0.14),分別為(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU計(jì)數(shù)池、CASA系統(tǒng)與血細(xì)胞計(jì)數(shù)池、Makler計(jì)數(shù)池結(jié)果間差異***(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:計(jì)數(shù)精液時(shí),CASA系統(tǒng)與CellVU計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)***性。各實(shí)驗(yàn)室可選擇合適的手工或CASA計(jì)數(shù)方法。
CASA系統(tǒng)進(jìn)行**分析應(yīng)注意以下幾點(diǎn):3.2**分析儀閾值的確定(1)精子灰度、對(duì)比度閾值:由于分析儀是根據(jù)灰度的高低來判斷精子的真?zhèn)危瑢?duì)亮度和對(duì)比度要求特別高,檢測(cè)時(shí)應(yīng)多次試用,尋找能準(zhǔn)確識(shí)別精子的比較好灰度閾值[8]。(2)碎片:測(cè)定精子濃度準(zhǔn)確性受**中細(xì)胞成份和非精子的顆粒物質(zhì)的干擾,測(cè)定活動(dòng)精子的百分率也受精子中非精子物質(zhì)的影響[9],這些也是需要注意的。對(duì)于系統(tǒng)誤認(rèn)為精子的非精子成分,如精原細(xì)胞、白細(xì)胞和非白細(xì)胞顆粒等,可人為準(zhǔn)確記數(shù)后在可刪除雜質(zhì)一欄將其舍去。3.3出現(xiàn)1次異常結(jié)果應(yīng)間隔復(fù)查反復(fù)檢查2?3次方能得出比較正確的結(jié)果。3.4對(duì)于無(wú)精子的患者應(yīng)仔細(xì)進(jìn)行視野檢查注意不要將雜質(zhì)誤認(rèn)為精子計(jì)數(shù)在內(nèi),應(yīng)將**3000ɡ離心15分鐘后,再涂片檢查,確認(rèn)無(wú)精后再出報(bào)告。所有操作人員都應(yīng)接受規(guī)范的CASA分析儀使用培訓(xùn),嚴(yán)格按照使用指南進(jìn)行操作?。
CASA精子運(yùn)動(dòng)速度和運(yùn)動(dòng)軌跡特征主要參數(shù)有:①軌跡速度(VCL):也稱曲線速度,即精子頭部沿其實(shí)際行走曲線的運(yùn)動(dòng)速度。②平均路徑速度(VAP):精子頭沿其空間平均軌跡的運(yùn)動(dòng)速度,這種平均軌跡是計(jì)算機(jī)將精子運(yùn)動(dòng)的實(shí)際軌跡平均后計(jì)算出來的,可因不同型號(hào)的儀器而有所改變。③直線運(yùn)動(dòng)速度(VSL):也稱前向運(yùn)動(dòng)速度,即精子頭部直線移動(dòng)距離的速度。④直線性(LIN):也稱線性度,為精子運(yùn)動(dòng)曲線的直線分離度,即VSL/VCL。⑤精子側(cè)擺幅度(ALH):精子頭實(shí)際運(yùn)動(dòng)軌跡對(duì)平均路徑的側(cè)擺幅度,可以是平均值,也可以是最大值。不同型號(hào)的CASA系統(tǒng)由于計(jì)算方法不一致,因此相互之間不可直接比較。⑥前向性(STR):也稱直線性,計(jì)算公式為VSL/VAP,亦即精子運(yùn)動(dòng)平均路徑的直線分離度。⑦擺動(dòng)性(WOB):精子頭沿其實(shí)際運(yùn)動(dòng)軌跡的空間平均路徑擺動(dòng)的尺度,計(jì)算公式為VAP/VCL。⑧鞭打頻率(BCF):也稱擺動(dòng)頻率,即精子頭部跨越其平均路徑的頻率。⑨平均移動(dòng)角度(MAD):精子頭部沿其運(yùn)動(dòng)軌跡瞬間轉(zhuǎn)折角度的時(shí)間平均值。⑩運(yùn)動(dòng)精子密度:每毫升精液中VAP>0μm/s的精子數(shù)。CASA系統(tǒng)主要用于精子動(dòng)力學(xué)的分析,可以評(píng)估精子的濃度、活力等參數(shù)。美國(guó)山羊精子分析精確溫度控制
精子分析儀能分析與精子運(yùn)動(dòng)功能相關(guān)的各種參數(shù)。廣州快速運(yùn)動(dòng)精子分析STR
精子分析儀是計(jì)算機(jī)技術(shù)和圖像處理技術(shù)結(jié)合的**分析儀器設(shè)備,通過顯微鏡下攝像和計(jì)算機(jī)快速分析多個(gè)視野內(nèi)精子的運(yùn)行軌跡,客觀記錄了精子的密度、活動(dòng)力、活動(dòng)率和存活率等各項(xiàng)參數(shù)。計(jì)算機(jī)輔助**分析儀由硬件系統(tǒng)和軟件系統(tǒng)組成。硬件系統(tǒng)主要由顯微攝像系統(tǒng)、圖像采集系統(tǒng)、恒溫系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)等四大系統(tǒng)構(gòu)成。此外,儀器一般配有**樣品盒,以確保單層取樣[1]。1.顯微攝像系統(tǒng):由顯微鏡及CCD組成。可以將標(biāo)本信號(hào)通過顯微放大由CCD傳輸?shù)接?jì)算機(jī)2.圖像采集系統(tǒng):由圖像卡構(gòu)成,其功能是對(duì)CCD信號(hào)進(jìn)行抓拍、識(shí)別、預(yù)處理后,將成熟信號(hào)輸送到計(jì)算機(jī)。3.恒溫系統(tǒng):由加溫和保溫設(shè)備組成。加溫是通過熱吹風(fēng)機(jī)不斷將適宜的溫度熱風(fēng)鼓入封閉保溫罩內(nèi),提供穩(wěn)定、可靠的檢查環(huán)境。4.計(jì)算機(jī)系統(tǒng):對(duì)圖像信號(hào)進(jìn)行***系統(tǒng)的加工處理,對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行輸出和存儲(chǔ)的設(shè)備。軟件系統(tǒng)采用**的精子質(zhì)量分析軟件,利用現(xiàn)代化的計(jì)算機(jī)識(shí)別技術(shù)和圖像處理技術(shù),對(duì)精子的動(dòng)靜態(tài)特征進(jìn)行***的量化分析,對(duì)精子的密度、活力、活率、運(yùn)動(dòng)軌跡等特征進(jìn)行量的檢測(cè)分析廣州快速運(yùn)動(dòng)精子分析STR