人類精子冷凍保存和儲(chǔ)存:增加了冷凍樣本的安全性、精液冷凍保存方案、快速液氮熏蒸冷凍、冷凍精液的解凍、玻璃化冷凍等內(nèi)容,更具可操作性。本手冊(cè)對(duì)人類精子的冷凍保存提出了具體建議:將樣本分管分罐分開儲(chǔ)存;對(duì)使用的材料和留存標(biāo)本建立定期核驗(yàn)程序;所有儲(chǔ)罐都應(yīng)有液位監(jiān)控報(bào)警系統(tǒng),以監(jiān)測溫度和液氮液位,傳感器應(yīng)連接警報(bào)器,可通過實(shí)驗(yàn)室人員的終端進(jìn)行提醒。新證據(jù)表明,玻璃化冷凍是冷凍保存精液的一種有價(jià)值的方法。該方法的原理是將小體積樣本與無污染液氮直接接觸并快速冷凍,可以防止冰晶的形成,并減少精子的滲透性損傷。在麥管玻璃化冷凍(無菌玻璃化冷凍)中,也可以使用封閉系統(tǒng),不需要無菌的液氮。IVOS已成為快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠的進(jìn)行精子分析的代名詞。香港人精子分析VCL
CASA可將每個(gè)精子的活力按以下分級(jí):(1)前向運(yùn)動(dòng)型(PR):精子運(yùn)動(dòng)活躍、線性運(yùn)動(dòng)或者在較大的范圍內(nèi)運(yùn)動(dòng)。(2)非前向運(yùn)動(dòng)型(NP):所有其他非前向運(yùn)動(dòng)的形式,如精子在較小的范圍內(nèi)運(yùn)動(dòng),精子頭部輕微移位或只觀察到尾部擺動(dòng)。(3)完全不動(dòng)型(IM):精子完全不動(dòng)。CASA系統(tǒng)檢測的這些參數(shù)有一套標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語。(1)VCL=曲線速度(mm/s)。精子頭沿其實(shí)際的曲線,即在顯微鏡下見到的二維方式運(yùn)動(dòng)軌跡的平均速度。檢測細(xì)胞活力。(2)VSL=直線速度(mm/s)。根據(jù)精子頭在開始檢測時(shí)的位置與***所處位置之間的直線運(yùn)動(dòng)的時(shí)間平均速度。(3)VAP=平均路徑速度(mm/s)。精子頭沿其空間平均軌跡移動(dòng)的時(shí)間平均速度。(4)ALH=精子頭側(cè)擺幅度(mm)。精子頭沿其空間平均軌跡側(cè)擺的幅度。以側(cè)擺的最大值或平均數(shù)值表示。(5)LIN=直線性。曲線軌跡的直線性。即VSL/VCL。(6)WOB=擺動(dòng)性。精子頭沿其實(shí)際軌跡的空間平均路徑擺動(dòng)的尺度。即VAP/VCL。(7)STR=前向性??臻g平均路徑的直線性。即VSL/VAP。(8)BCF=鞭打頻率(Hz)。精子曲線軌跡越過其平均路徑軌跡的時(shí)間平均速率。(9)MAD=平均移動(dòng)角度(度)。精子頭沿其曲線軌跡瞬間轉(zhuǎn)折角度的時(shí)間平均***值。廣州前向運(yùn)動(dòng)精子分析DSL在男科和輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域,精子質(zhì)量的評(píng)估是診斷和處理的重要環(huán)節(jié)。
CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學(xué)評(píng)估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學(xué)、中段甚至主段的形態(tài),可以把精子頭部和中段分類為正?;蛘卟徽?,還可以給出頭部和中段尺度、頭部橢圓率和勻稱性的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和中位數(shù),以及對(duì)染色的精子頂體區(qū)進(jìn)行測量[3]。與人工操作相比,自動(dòng)化系統(tǒng)更具客觀性,精確度和重復(fù)性的潛力[4]。精確度和重復(fù)性不低于7%[5],這優(yōu)于有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員的手工評(píng)估。兩個(gè)研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動(dòng)分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預(yù)示體外受精率和妊娠率的有意義指標(biāo)[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比(Z%),和直線速度(VSL)的精子的百分比,與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關(guān)系。Z%和VSL與生育力間的關(guān)系顯示是連續(xù)的,而且沒有顯示臨界值;高于臨界值,妊娠率也不會(huì)進(jìn)一步增加[7]。
醫(yī)生為了鑒定男性生育能力,常囑男方作精液檢查,正常精液顏色為灰白色或乳白色。如節(jié)欲時(shí)間長者,可呈淡黃色,若出現(xiàn)鮮紅色.暗紅色,則提示患者有炎癥或生殖道損傷。每次排精量為2~6毫升,常受排精次數(shù)與頻率的影響。新鮮精液呈稠厚膠凍狀,1小時(shí)之內(nèi)應(yīng)液化為稀薄的液體,用一根小玻璃棒插入精液中再提起,所形成的精液絲長度一般不超過2厘米,否則視為異常。精液呈弱堿性,PH值為7.2~7.8。正常精子數(shù)應(yīng)超過2000萬/毫升。排精后1小時(shí)內(nèi)活動(dòng)精>=50%。世界衛(wèi)生組織推薦精子活動(dòng)力分為四級(jí):0級(jí):不活動(dòng);1級(jí):精子原地?cái)[動(dòng);2級(jí):有中等的前向運(yùn)動(dòng);3級(jí):前向運(yùn)動(dòng)活躍,快速直線運(yùn)動(dòng)。正常的精子活動(dòng)力為2~3級(jí)的精子>=40%~50%.精子形態(tài):畸形精子小于50%。分析男性生育能力不能單從精液的一項(xiàng)指標(biāo)定論,應(yīng)對(duì)精子數(shù)量活力活動(dòng)率液化時(shí)間畸形率等多方面進(jìn)行綜合能力分析。采集精液前5~7天內(nèi)必須停止性生活,并且不得有**、夢遺等情況,還應(yīng)禁煙戒酒,忌服對(duì)生精功能有影響的藥物等。WHO第6版明確提出:使用CASA系統(tǒng)須遵循適當(dāng)?shù)某绦虿襟E,才能獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果。
七、精子形態(tài)檢查[正常參考值]畸形精子:<10%-15%;凝集精子:<10%;未成熟精細(xì)胞:<1%。[臨床意義]1.精索靜脈曲張病人的畸形精子增多,提示精子在不成熟時(shí)已進(jìn)入精液,或靜脈回流不暢造成陰囊內(nèi)溫度過高和睪丸組織缺氧,或血液帶有毒性代謝產(chǎn)物從腎或腎上腺靜脈逆流至睪丸,上述原因均有損于精子形態(tài)。2.精液中凝集精子增多,提示生殖道***或免疫功能異常。3.睪丸曲細(xì)精管生精功能受到藥物或其他因素影響或傷害時(shí),精液中可出現(xiàn)較多病理性未成熟精細(xì)胞。八、精液細(xì)胞檢查[正常參考值]白細(xì)胞(WBC):<5個(gè)/HP(高倍鏡視野);紅細(xì)胞(RBC):0-偶見/HP。[臨床意義]1.精液中白細(xì)胞增多,常見于精囊炎、前列腺炎及結(jié)核等。2.精液中紅細(xì)胞增多,常見于精囊結(jié)核、前列腺*等。3.精液中若查到*細(xì)胞,對(duì)生殖系*有診斷意義。CASA系統(tǒng)操作簡便,檢測速度快,且重復(fù)性優(yōu)于人工檢測。南京慢速運(yùn)動(dòng)精子分析負(fù)相差
CASA系統(tǒng)主要用于精子動(dòng)力學(xué)的分析,可以評(píng)估精子的濃度、活力等參數(shù)。香港人精子分析VCL
九、精液酸堿度(pH)檢查[正常參考值]7.2-8.0。[臨床意義]1.精液pH值<7.0,多見于少精或無精癥,常反映輸精管道阻塞、先天性精囊缺如或附睪病變等。2.精液pH值>8.0,常見于急性***,如精囊炎、前列腺炎等。十、男性生育力指數(shù)測定[計(jì)算公式]I=M(N×V)/(A×106)式中I為男性生育力指數(shù);M為活動(dòng)精子百分率;N為每毫升的精子數(shù);V為精子運(yùn)動(dòng)的速度;A為畸形精子的百分率。[正常參考值]正常人生育力指數(shù)>l。[臨床意義]1.生育指數(shù)為0,表明完全無生育能力。2.生育指數(shù)為0-1之間,表明有不同程度的生育障礙。香港人精子分析VCL