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“自動?化監(jiān)測技術(shù)在水質(zhì)檢測中的實(shí)施與應(yīng)用”在《科學(xué)家》發(fā)表
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每個生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測
我們已經(jīng)開發(fā)了兩種臨床相關(guān)蛋白的檢測方法——前列腺特異性抗原(PSA)和腫瘤壞死因子α(TNF-α),以確定高酶標(biāo)記物單體提供的靈敏度轉(zhuǎn)化為高靈敏度的檢測方法血液中的蛋白質(zhì)。兩種蛋白質(zhì)的數(shù)字ELISA如圖1所示。開發(fā)這些試驗(yàn)的關(guān)鍵參數(shù)是:珠子濃度和兩種標(biāo)記試劑(檢測試劑和酶偶聯(lián)物)的濃度。珠子濃度的選擇取決于幾個相互競爭的因素。首先,足夠的珠子必須在場以從熱力學(xué)和動力學(xué)中捕獲大部分目標(biāo)分析物從熱力學(xué)角度看,100μL中有20萬個珠子,每個珠子大約有8萬個與之結(jié)合的抗體25相當(dāng)于約0.3nM的抗體濃度,在該濃度下,抗體-蛋白平衡導(dǎo)致高捕獲效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未發(fā)表工作)。 POCT 芯片卡片式設(shè)計(jì)占地小,全自動化操作,適用于院前急救、EICU 等緊急場景。哪些是數(shù)字ELISA使用效果
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檢測方法為陣列成像。陣列成像涉及對陣列中的每個孔進(jìn)行檢測以確定是否存在微球并判斷微球是否具有酶活性。為此,開發(fā)了一種圖像分析軟件,該軟件首先創(chuàng)建一個陣列的“掩?!保远x孔定位和邊界進(jìn)行檢測。然后將孔掩模應(yīng)用于陣列的熒光圖像,以確定孔內(nèi)微球和酶的存在。對于陣列的熒光圖像,當(dāng)進(jìn)行多重檢測時,會生成微球群體或微球亞群的熒光強(qiáng)度直方圖。直方圖中的峰值自動識別并用于確定微球群體??蒲杏脭?shù)字ELISA靈敏度芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產(chǎn)品,極速檢測,快至15min就能完成的單分子免疫檢測!
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人類形式的蛋白質(zhì)被加入到25%牛血清中以代替臨床測試樣本;通常使用四倍稀釋因子以減少免疫測定中的基質(zhì)效應(yīng)4。使用數(shù)字ELISA檢測25%血清中的PSA,從該實(shí)驗(yàn)中確定了LOD為~50aM(1.5fg/mL),相當(dāng)于整個血清中的LOD為~200aM(6fg/mL)。檢測到的比較低濃度為250aM,相當(dāng)于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通過外推背景濃度來確定的加上背景的三個標(biāo)準(zhǔn)差,不同運(yùn)行的LOD取決于背景的CV。在具有典型背景方差的幾個實(shí)驗(yàn)中,全血清PSA的亞飛摩爾LOD得以保持。相比之下,一種前列的商業(yè)PSA檢測方法(ADVIACentaur,西門子)報(bào)告在人血清中的LOD為3pM(0.1ng/mL),并且已經(jīng)報(bào)道了LOD在10-30fM17,26。
創(chuàng)新性的解決方案:芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA應(yīng)用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測,可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測產(chǎn)品。蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物在區(qū)分健康和疾病狀態(tài)方面的臨床應(yīng)用,而監(jiān)測疾病進(jìn)展則需要測量復(fù)雜樣品中的低濃度蛋白質(zhì)。目前的免疫測定方法測量的是蛋白質(zhì)的濃度高于10?12M,6而大多數(shù)在病癥7、神經(jīng)疾病8,9和接觸早期階段10中重要的蛋白質(zhì)的濃度被認(rèn)為在10?16到10?12M之間。需要提高靈敏度的例子包括:一個由一百萬個細(xì)胞組成的1毫米3疾病,每個細(xì)胞分泌5000種蛋白質(zhì)到5升液體中。Simoa®由現(xiàn)任于哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的DavidWalt教授作為科學(xué)創(chuàng)始人于2007年創(chuàng)立。DavidWalt是美國的工程院,藝術(shù)院和醫(yī)學(xué)院三院院士。2010年,DavidWalt將Simoa®技術(shù)以封面文章的形式發(fā)表在《NatureBiotechnology》上,此技術(shù)開始為大眾所知并引起業(yè)界轟動。Simoa技術(shù)(Single-moleculeArray,Quanterix公司)特點(diǎn)是通用陣列化檢測,實(shí)現(xiàn)超高的靈敏度,較傳統(tǒng)ELISA方法能夠高出3個數(shù)量級,達(dá)到飛克級別(fg/ml)甚至更低。已拿阿茲海默癥的兩個FDAbreakthroughdevice;通常用于各種科研方向:神經(jīng)因子、蛋白組學(xué)、細(xì)胞因子等。 芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測產(chǎn)品,10ul樣本可同時測2-4個指標(biāo)!
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我公司推出的數(shù)字化高靈敏ELISA芯片檢測產(chǎn)品應(yīng)用場景:適合生物實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室、科研市場、產(chǎn)品預(yù)研、產(chǎn)品開發(fā)、ELISA檢測、動物病情檢測等各種應(yīng)用場景應(yīng)用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測,可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測產(chǎn)品。
根據(jù)目標(biāo)蛋白的抗體制備了功能化的微球生產(chǎn)商說明。含有目標(biāo)蛋白的100-μL測試溶液與200,000個磁珠懸浮液孵育2小時至23°C。然后將磁珠分離并用PBS和0.1%Tween-20洗滌三次。磁珠重新懸浮后與含有檢測抗體(通常約為1nM)的溶液孵育45分鐘。在23°C下最小值。然后將珠子分別用PBS和0.1%洗滌三次。Tween-20。將珠子與含有SβG(1–50pM)的溶液在23°C孵育30分鐘,然后分離并在PBSand0.1%Tween-20中洗滌六次。隨后將珠子重懸于10μLofPBS中,并加載到飛升液位陣列中。整個實(shí)驗(yàn)的總時間約為~6小時。 POCT 芯片靈敏度媲美化學(xué)發(fā)光技術(shù),可檢測超敏肌鈣蛋白 T 等關(guān)鍵急診標(biāo)志物??蒲杏脭?shù)字ELISA靈敏度
芯棄疾JX-8B單分子普惠化ELISA檢測產(chǎn)品,超敏檢測,理論可達(dá)飛克級;哪些是數(shù)字ELISA使用效果
抗體篩選芯片的正交驗(yàn)證能力,抗體篩選芯片支持同一反應(yīng)體系下不同樣本的交叉反應(yīng)測試,為抗體的正交驗(yàn)證提供了高效平臺。在篩選IL-6抗體對時,可同時測試8種捕獲抗體與8種標(biāo)記抗體的組合,通過陰性質(zhì)控品與陽性質(zhì)控品的比值分析,快速排除非特異性配對,篩選出親和力常數(shù)(KD)<10??M的高特異性抗體。該能力在復(fù)雜樣本(如含有異嗜性抗體的血清)檢測中尤為重要,可提前識別潛在干擾因素,提升診斷試劑盒的臨床適用性。此外,芯片的低密度陣列設(shè)計(jì)(如3×7排列)便于后續(xù)單克隆抗體的克隆化篩選,形成從初步篩選到精細(xì)優(yōu)化的完整技術(shù)鏈條,加速抗體藥物與診斷試劑的研發(fā)周期。哪些是數(shù)字ELISA使用效果