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來源: 發(fā)布時間:2022-10-23

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Luminex液相懸浮芯片是基于高通量微孔板的多重檢測抗體芯片技術(shù)。其基本原理是將高度特異的捕獲單克隆抗體偶聯(lián)到不同熒光標記的磁珠上,將不同種類磁珠混合后懸浮于96孔微孔板中。在檢測時,一束激光照射磁珠上的熒光,識別磁珠標記的捕獲抗體,從而獲知該磁珠可檢測哪種細胞因子,從而實現(xiàn)“定性”作用。進一步,通過加入生物素標記的高親和配對檢測抗體,同步識別磁珠抓取的目標細胞因子,形成“三明治”結(jié)構(gòu),并加入SA-PE偶聯(lián)上生物素,通過另一束激光照射進行信號放大檢測,實現(xiàn)“定量”作用。CD20檢測服務(wù)LabEx提供多音字檢測服務(wù)!

Q:樣本處理方案?A:血清:不含抗凝劑的**管**,室溫靜置2小時(避免震動,防止溶血),離心20min(4℃,2000g),取上清,建議再一次離心和取上清,建議分裝后-80℃凍存,避免反復(fù)凍存血漿:含抗凝劑(EDTA、肝素,具體采取哪種抗凝劑,參考說明書)的**管**,,離心20min(4℃,2000g),取上清,建議再一次離心和取上清,建議分裝后-80℃凍存,避免反復(fù)凍存細胞裂解液:收集細胞,PBS清洗后,離心10min(1000g,4℃),棄去上清,加入適量裂解液(107細胞對應(yīng)200-300ul裂解液),放置于4℃冰箱(20min),離心10min(3000g,4℃),取上清,建議再一次離心和取上清,測定BCA總蛋白濃度,-80℃保存組織裂解液:適量RIPA裂解液加入組織中(10mg對應(yīng)100-200ul裂解液),組織破碎器處理組織至勻漿(冰上處理),放置于4℃冰箱(20min),離心10min(3000g,4℃),取上清,建議再一次離心和取上清,測定BCA總蛋白濃度,-80℃保存細胞上清:離心,取上清,建議分裝后-80℃凍存,避免反復(fù)凍存

多重?zé)晒饷庖呓M化,主要的技術(shù)原理來自TSA技術(shù),TSA即酪酰胺信號放大技術(shù)(Tyramidesignalamplification),是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學(xué)檢測方法。該技術(shù)可與高性能染料AlexaFluor、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測系統(tǒng)相兼容。簡單來說,用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素),來催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過氧化氫的作用下被活化,跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價偶聯(lián),使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后微波處理,前一輪非共價結(jié)合的抗體被洗掉,共價結(jié)合的熒光素還留存在樣品上。再換個一抗來第二輪孵育,周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束,熒光素都結(jié)合好后,然后去檢測結(jié)果。高通量蛋白組學(xué)(Olink)采用獨有的 PEA,鄰位延伸分析技術(shù)檢測蛋白標志物。

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Luminex既能檢測蛋白,又能檢測核酸。elisa檢測價格檢測服務(wù)

液態(tài)流式技術(shù)(Luminex)特點:多重檢測:理論上可同時檢測100種生物靶標。節(jié)省樣品:只需低至25μl的樣品體積。高靈敏度:精確定量下限低至0.1pg/mL。應(yīng)用范圍應(yīng)用領(lǐng)域:免疫、炎癥、心血管疾病、腫塊物研究、腎、代謝、神經(jīng)、細胞間作用。分析物類型:細胞因子、炎癥因子、趨化因子、粘附因子、脂肪因子、血管生成蛋白、腫塊物標記物、基質(zhì)金屬蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑。其他應(yīng)用:信號通路、重大疾病相關(guān)、Biomarker開發(fā)、臨床應(yīng)用。elisa檢測價格檢測服務(wù)

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