酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)(Elispot)特點(diǎn):酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)Elispot(Enzyme-linkedImmunospotAssay)。結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA),能夠在單細(xì)胞水平檢測細(xì)胞因子的分泌情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在96孔培養(yǎng)板上進(jìn)行,直接以培養(yǎng)板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纖維素膜為基質(zhì),包被上特異性的單克隆抗體,用以捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。(由于涉及到細(xì)胞培養(yǎng)的過程,對(duì)單克隆抗體的要求要遠(yuǎn)高于ELISA中的捕獲抗體,該抗體需要無毒,親和力高等特點(diǎn)。)之后,在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入細(xì)胞培養(yǎng)基(現(xiàn)在無血清ELISPOT技術(shù)已經(jīng)成熟,培養(yǎng)基中可以不再含有血清)、待檢測的細(xì)胞以及抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)。多因子技術(shù)服務(wù)我們LabEx是專業(yè)!炎性因子
抗體芯片技術(shù)服務(wù)包括:1,樣品蛋白質(zhì)抽提:a.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑,勻漿后抽提總蛋白。b.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細(xì)胞,PBS清洗細(xì)胞,去PBS加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑抽提總蛋白。c.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為血清,則直接進(jìn)入步驟3。2,蛋白質(zhì)定量:按蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。3.細(xì)胞因子抗體芯片封閉和抗體孵育a.細(xì)胞因子抗體芯片封閉后加入50-500ug蛋白質(zhì)(若標(biāo)本為血清,通常取100ul血清)與抗體芯片4℃孵育過夜。b.加入標(biāo)記好的抗體室溫孵育1小時(shí)。4,抗體芯片檢測5.提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法和芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果的各種圖表和數(shù)據(jù)比較。您只需提供保存完好的標(biāo)本(血清、組織或細(xì)胞、細(xì)胞上清或其他非常規(guī)液質(zhì)生物樣本),本公司專業(yè)的技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成實(shí)驗(yàn)操作與數(shù)據(jù)分析。PAI-1LabEx提供 炎癥因子、趨化因子、生長因子等高通量高靈敏檢測。
問:因子檢測技術(shù)有哪些?答:Array抗體芯片、CBA、luminex、MSD。問:多因子實(shí)驗(yàn)適用的樣本類型有哪些?答:Serum(血清)、Plasma(血漿)、Cell/Tissuelysate(細(xì)胞/組織裂解液)、CerebrospinalFluid(腦脊液)、支氣管肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液、腹腔液等等。問:如何計(jì)算96孔板可做多少樣本?答:標(biāo)曲16孔,預(yù)實(shí)驗(yàn)8孔,剩余72孔,單孔可做72樣本,復(fù)孔可做36樣本;問:多因子實(shí)驗(yàn)的正式實(shí)驗(yàn),是否可以分批次檢測?答:可以,但是有如下要注意:(1)CBA:試劑盒須在一個(gè)月內(nèi)用完,否則標(biāo)準(zhǔn)曲線要重做,重做就要用到試劑,那樣本就樣減少。(2)Luminex:每次都必須要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,會(huì)浪費(fèi)試劑和孔板,同時(shí)試劑也要在一個(gè)月內(nèi)用完,防止試劑過期。(3)MSD:每次都必須要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,會(huì)浪費(fèi)試劑和孔板,同時(shí)試劑在一個(gè)月內(nèi)用完,防止試劑過期,每次送樣+標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)量,建議是4的倍數(shù),否則會(huì)造成浪費(fèi)。
Luminex:應(yīng)用微球和流式細(xì)胞儀的原理,微球內(nèi)部含有三種免疫熒光,通過熒光不同的比例可以區(qū)分500種不同的微球。每種微球可以用來檢測一種不同的蛋白或基因。因此,利用微球技術(shù),可以同時(shí)檢測高達(dá)500個(gè)蛋白或基因。Luminex技術(shù)的測量結(jié)果在準(zhǔn)確度、精確度、靈敏度方面與ELISA均可達(dá)到相似的水平。Luminex應(yīng)用的熒光編碼微球帶有針對(duì)不同目標(biāo)分子的特異性抗體,不同的微球在一定程度上可以自由組合,這樣在一次實(shí)驗(yàn)中可以同時(shí)完成多個(gè)目標(biāo)分子的分析。多目標(biāo)分子的同時(shí)測定可以**減少生物樣品的消耗量,節(jié)省成本和測定時(shí)間,并且使多種目標(biāo)分子之間相關(guān)性的分析更加準(zhǔn)確。目前,Luminex試劑盒已經(jīng)可以檢測500多種蛋白質(zhì)分子,包括細(xì)胞因子、***、自身抗體、**標(biāo)志物等。細(xì)胞因子檢測是一個(gè)強(qiáng)大的工具,通過定制識(shí)別產(chǎn)生積極反應(yīng)的細(xì)胞因子的獨(dú)特組合。
免疫組化技術(shù)是用標(biāo)記物標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞的抗原(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、***、病原體以及受體等)反應(yīng),結(jié)合形態(tài)學(xué)檢查,對(duì)抗原作定性、定量、定位檢測的技術(shù)。目前通常選用免疫酶組化間接染色法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),利用該技術(shù)可進(jìn)行細(xì)胞、亞細(xì)胞水平的檢測。 **近幾年,分子生物學(xué)研究異?;钴S,但**終還要?dú)w到形態(tài)上來。用免疫組織化學(xué)方法對(duì)所研究的大分子進(jìn)行定位,進(jìn)而深入研究其功能。 分類:免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等 特點(diǎn):具有特異性強(qiáng)、靈敏度高及能將形態(tài)研究與功能、代謝研究有機(jī)地結(jié)合在一起 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本:實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。 抗體:免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體LabEx多因子檢測技術(shù)--液相懸浮技術(shù)。趨化因子家族
多因子技術(shù)可同時(shí)檢測多個(gè)樣本的多個(gè)指標(biāo),如通路中多個(gè)相關(guān)蛋白的共檢測。炎性因子
1)LUMINEX應(yīng)用于哪些領(lǐng)域?生物醫(yī)學(xué)研究,生物標(biāo)記物開發(fā),臨床檢測等領(lǐng)域。Luminex技術(shù)主要用于蛋白和核酸檢測分析。2)LUMINEX敏感性如何?靈敏度取決于開頭的質(zhì)量。對(duì)于同樣的抗體對(duì),Luminex檢測的靈敏度高于ELISA技術(shù)。一般檢測靈敏度在pg級(jí)。3)對(duì)不同類型的樣品制備和樣品量的要求是怎樣的?血清、血漿是常用的樣本,每次檢測需要10ul,每次可以檢測多個(gè)蛋白。從各種細(xì)胞或組織中提取的蛋白也可以用Luminex技術(shù)檢測,制備方法與ELISA、WesternBlot完全一樣。4)一般可以檢測到多少基因或蛋白的表達(dá)信息?檢測蛋白和基因的數(shù)目主要取決于試劑盒。蛋白質(zhì)檢測目前比較高可以達(dá)到50個(gè)左右,基因檢測比較高達(dá)500個(gè)。5)如何保證檢測結(jié)果的特異性?檢測的特異性取決于抗體高特異性。試劑幾乎全部來源于美國大公司,產(chǎn)品經(jīng)過了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。同時(shí),我們檢測公司也有近15年的經(jīng)驗(yàn)、嚴(yán)格的操作程序和質(zhì)量控制體系。6)客戶自己提供抗體,是否可以進(jìn)行LUMINEX檢測?Luminex和ELISA檢測試劑都需要兩個(gè)配套的特異性抗體。我們公司具有開發(fā)Luminex試劑盒的經(jīng)驗(yàn)。但是,需要一系列的開發(fā)工作才能保證結(jié)果的特異性、重復(fù)性和可靠性。炎性因子
上海樂備實(shí)生物技術(shù)有限公司坐落在古丹路15號(hào)18號(hào)樓4樓,是一家專業(yè)的從事生物科技、生物制品、醫(yī)藥科技領(lǐng)域的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)服務(wù),檢驗(yàn)技術(shù)的研發(fā),從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù),化工產(chǎn)品及原料(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、易制毒化學(xué)品)、實(shí)驗(yàn)室耗材與設(shè)備的銷售。 【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng)】公司。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才,以不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競爭力,加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營。上海樂備實(shí)生物技術(shù)有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋標(biāo)志物篩查,多因子檢測,Luminex檢測,MSD技術(shù)服務(wù),堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司深耕標(biāo)志物篩查,多因子檢測,Luminex檢測,MSD技術(shù)服務(wù),正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間、更寬泛的領(lǐng)域拓展。